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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助:同源重组问题
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sunxiaolin

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助:同源重组问题

各位大侠，有一问题请教，我现在在做中断，用到BW25113这个菌，我将PCR之后的抗性卡壳电转化进入BW中，进行文库质粒与卡壳之间的重组，长出菌落后，进行PCR验证，可是只有一条带，是安普抗性的卡壳没有插入我的基因中的条带，我想问，为什么抗性卡壳没插入文库质粒中，但是在含有安普的平板上却能长出菌落？多谢各位指教！
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1楼 2009-04-01 10:37:32
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gandalf886

银虫 (小有名气)
是挺卡壳的，BW是什么，安普是什么
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2楼2009-04-01 18:58:21
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sunxiaolin

铜虫 (初入文坛)
BW是一种大肠杆菌，里面含有一个质粒，可以表达重组酶。
安普拉，是一种抗生素
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3楼2009-04-02 08:55:31
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gandalf886

银虫 (小有名气)
我仔细看了一下，你是想把“安普拉”抗性片段同源重组到文库质粒上。
文库质粒是高拷贝的吧，而同源重组的概率本身又很低，一个“卡壳”可能与BW中的一个文库质粒发生重组，从而使BW具有安普拉抗性；而BW中可能剩余很多质粒是不发生变化的，所以p出来的片段还是跟以前一样啊。
还有，没准安普拉卡壳插到基因组上去了呢。

[ Last edited by gandalf886 on 2009-4-2 at 16:34 ]
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4楼2009-04-02 16:32:24
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大飞370

铜虫 (小有名气)
做个空白菌对照，看是否是因为抗生素失效了。有可能是抗生素降解到不足以抑制野生菌生长的浓度了
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5楼2009-04-02 18:03:51
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