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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于融合蛋白的酶切问题
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61930979

金虫 (小有名气)

[交流] 关于融合蛋白的酶切问题

本人现在得到了纯化的蛋白，想要做复性，准备使用复性试剂盒，但之前要先进行酶切，融合蛋白上携带的是凝血酶切割位点，因为对酶切的具体操作不太懂，特想求助一下，怎样确定酶切的条件（凝血酶切割的条件），有人说要摸索不同的条件，即温度、时间、酶浓度，是不是这样呢？？麻烦高手给具体指点一下，不胜感激！！
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1楼 2009-03-31 23:18:07
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alexlv

银虫 (小有名气)
肯定是先复性，不然你的酶放在变性液里面就变性了。文献太多了。没什么特别的。
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6楼2009-04-02 09:00:58
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alexlv

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
61930979(金币+3,VIP+0): 谢 4-1 17:07
变性条件下没法酶切，因为变性缓冲液条件不适合酶切，复性后，再酶切比较好，酶切条件按照说明书就可以了。
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2楼2009-04-01 09:19:44
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61930979

金虫 (小有名气)
谢谢 提醒
我打算买复性试剂盒的，技术支持说最好是酶切后再复性。
你说的也对 酶切是要求在ph8.0下进行的，而我的纯化产物pH为4.5，确实不适合酶切
那就是要先按复性试剂盒说明书先复性看看效果，效果不行再酶切吗？？
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3楼2009-04-01 14:03:51
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
61930979(金币+2,VIP+0):ok 4-1 17:08
变性条件下的变性剂会极大抑制酶活性，复性后再摸索酶切条件吧，对于不同的融和蛋白，酶切效果差别很大，多摸索一下温度和时间条件才
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4楼2009-04-01 14:52:41
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