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61930979

金虫 (小有名气)

[交流] 关于融合蛋白的酶切问题

本人现在得到了纯化的蛋白,想要做复性,准备使用复性试剂盒,但之前要先进行酶切,融合蛋白上携带的是凝血酶切割位点,因为对酶切的具体操作不太懂,特想求助一下,怎样确定酶切的条件(凝血酶切割的条件),有人说要摸索不同的条件,即温度、时间、酶浓度,是不是这样呢??麻烦高手给具体指点一下,不胜感激!!
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alexlv

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
61930979(金币+3,VIP+0): 谢 4-1 17:07
变性条件下没法酶切,因为变性缓冲液条件不适合酶切,复性后,再酶切比较好,酶切条件按照说明书就可以了。
2楼2009-04-01 09:19:44
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61930979

金虫 (小有名气)

谢谢 提醒
我打算买复性试剂盒的,技术支持说最好是酶切后再复性。
你说的也对 酶切是要求在ph8.0下进行的,而我的纯化产物pH为4.5,确实不适合酶切
那就是要先按复性试剂盒说明书先复性看看效果,效果不行再酶切吗??
3楼2009-04-01 14:03:51
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
61930979(金币+2,VIP+0):ok 4-1 17:08
变性条件下的变性剂会极大抑制酶活性,复性后再摸索酶切条件吧,对于不同的融和蛋白,酶切效果差别很大,多摸索一下温度和时间条件才
4楼2009-04-01 14:52:41
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61930979

金虫 (小有名气)

谢谢
希望有人能提供相关方面(先复性后酶切)的论文以供参考
5楼2009-04-01 17:10:27
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alexlv

银虫 (小有名气)

肯定是先复性,不然你的酶放在变性液里面就变性了。文献太多了。没什么特别的。
6楼2009-04-02 09:00:58
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