24小时热门版块排行榜    

查看: 448  |  回复: 5
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

61930979

金虫 (小有名气)

[交流] 关于融合蛋白的酶切问题

本人现在得到了纯化的蛋白,想要做复性,准备使用复性试剂盒,但之前要先进行酶切,融合蛋白上携带的是凝血酶切割位点,因为对酶切的具体操作不太懂,特想求助一下,怎样确定酶切的条件(凝血酶切割的条件),有人说要摸索不同的条件,即温度、时间、酶浓度,是不是这样呢??麻烦高手给具体指点一下,不胜感激!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
61930979(金币+2,VIP+0):ok 4-1 17:08
变性条件下的变性剂会极大抑制酶活性,复性后再摸索酶切条件吧,对于不同的融和蛋白,酶切效果差别很大,多摸索一下温度和时间条件才
4楼2009-04-01 14:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

alexlv

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
61930979(金币+3,VIP+0): 谢 4-1 17:07
变性条件下没法酶切,因为变性缓冲液条件不适合酶切,复性后,再酶切比较好,酶切条件按照说明书就可以了。
2楼2009-04-01 09:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

61930979

金虫 (小有名气)

谢谢 提醒
我打算买复性试剂盒的,技术支持说最好是酶切后再复性。
你说的也对 酶切是要求在ph8.0下进行的,而我的纯化产物pH为4.5,确实不适合酶切
那就是要先按复性试剂盒说明书先复性看看效果,效果不行再酶切吗??
3楼2009-04-01 14:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

61930979

金虫 (小有名气)

谢谢
希望有人能提供相关方面(先复性后酶切)的论文以供参考
5楼2009-04-01 17:10:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 芦lty 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:25 by 芦lty
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-03-21 11/550 2026-03-25 10:11 by 雾散后相遇lc
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见