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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 关于克隆表达的一些问题
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sunxin1234

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于克隆表达的一些问题 已有1人参与

做rhodanese纯化。通过全基因合成将其表达到大肠杆菌中。载体是pet28a，抗性卡那。有几个问题想请教一下各位大佬。
1 培养时培养基怎么选？LB培养基？  加不加抗生素？加的话是加卡那？加多少？   摇菌培养的温度，转速，时间是多少？OD值要达到多少？
2 合成的时候，合成了一个带his标签的一个不带的。分离纯化时不带标签的用什么柱子？带标签的用什么柱子？

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1楼 2018-07-26 11:42:18
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macgray11

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-07-26 13:53:41
渊博震天: 金币-5, 应助指数-1, 非应助贴请不要点击应助 2018-07-26 13:54:41
本帖内容被屏蔽
2楼2018-07-26 12:59:15
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sunxin1234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by macgray11 at 2018-07-26 12:59:15
做rhodanese纯化。通过全基因合成将其表达到大肠杆菌中。载体是pet28a，抗性卡那。有几个问题想请教一下各位大佬。
1 培养时培养基怎么选？LB培养基？  加不加抗生素？加的话是加卡那？加多少？   摇菌培养的温度， ...

这个公司已经表达好了。我回来好像只需要摇菌培养就可以了吧。。。不用再做诱导表达了吧

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3楼2018-07-26 15:18:23
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xuyuzhi

新虫 (正式写手)
一道生物支持你

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17343151072目前在一道生物，常联系
4楼2018-07-26 15:18:38
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macgray11

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
5楼2018-07-26 15:58:00
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sunxin1234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by macgray11 at 2018-07-26 15:58:00
表达这块我不是很了解，我认为还是需要加诱导剂的...

嗯嗯  谢谢了

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6楼2018-07-26 18:49:41
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白话八股

金虫 (正式写手)
添加诱导剂，蛋白才能表达。不带标签的，无法用镍柱纯化，考虑硫酸铵沉淀，离子交换。。。

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最爱的那个人会出现在身边。
7楼2018-07-27 00:18:51
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