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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 桃叶绿体DNA提取跑胶条带不清楚不是很亮
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赵阿香

新虫 (初入文坛)

[求助] 桃叶绿体DNA提取跑胶条带不清楚不是很亮 已有1人参与

提了很多次叶绿体DNA跑胶都不明显，不是条带拖，是条带根本就不太亮，用百分之1.5的琼脂糖凝胶跑电泳，2μ升的溴酚蓝加7μ升的提出来的DNA样混合点样，就想问一下大神们问题可能出在哪里，是样品量不够吗？还是EB不太够？我的提取方法也就是原始文献里的冰域研磨，高盐低ph.提取叶绿体，sds37℃裂解，无水乙醇沉淀一晚上，无菌水溶解。
重复了很多次，调整了很多次，可是跑胶结果都是不亮，隐约是有条带的，可是一开始都看不清楚，在软件上看的话由于设施老化了，调好需要很长时间，之后胶连那条蓝色都退了，也是本科独立的第一个实验，有很多不扎实的知识，还希望大家可以提点一下，问题可能出在哪里？

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-07-21 23:03:54
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赵阿香

新虫 (初入文坛)
没有人吗

发自小木虫Android客户端
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2楼2018-07-24 10:58:21
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柚子呀oo

新虫 (初入文坛)


同本科
要提叶绿体DNA
我现在做了几次实验，只是用紫外分光光度计进行了检测，还没有跑胶
但是也感觉曲线不对，啥都没提出来...

想问一下，用乙醇沉淀了DNA以后，如何清洗晾干呢？  也不能用烘箱，但是我用75%的乙醇清洗了DNA（估计也没提出来）后，晾一个小时它也不干呐！
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3楼2018-07-24 14:05:48
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macgray11

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2018-07-24 16:13:24
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Mengrui1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 柚子呀oo at 2018-07-24 14:05:48


同本科
要提叶绿体DNA
我现在做了几次实验，只是用紫外分光光度计进行了检测，还没有跑胶
但是也感觉曲线不对，啥都没提出来...

想问一下，用乙醇沉淀了DNA以后，如何清洗晾干呢 ...

放在通风的地方，比如通风橱之类的地方
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5楼2018-07-27 15:33:48
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皮皮加油吧

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2018-07-27 18:25:24
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柚子呀oo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 皮皮加油吧 at 2018-07-27 18:25:24
小心吸出上清液，把管子放通风橱，一般一个小时就可以了。
...

嗯嗯好的，谢谢！
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7楼2018-07-30 13:09:01
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提取小仙

新虫 (初入文坛)
先排查问题吧，电泳时，做一个阳性对照，比如：加一个D2000的maker。看看是不是胶或者燃料的问题。

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8楼2018-07-30 22:15:57
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