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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于杆状病毒表达系统的一些问题？
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寻一束光

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于杆状病毒表达系统的一些问题？ 已有1人参与

关于杆状病毒表达系统的一些问题？
1.如果我不测滴度的话，按照理论P3滴度是不是大于1X108了，那么我表达蛋白的时候能不能就按照1X108，MOI值5 来计算病毒加入的量，这样对表达量影响大么？
2.收菌的时间是48-72h,72h的时候已经有一些细胞破碎了，细胞活力在70-80%，我看手册上说，“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”是不是说收获的时候细胞活力只有20%，那岂不是很多细胞都破碎了，蛋白不就被降解了么？文献又有说细胞活力在90%的时候收，所以我就很困惑，什么时间收比较好
3.表达后，菌液高压破碎后特别稠，堵柱子，流过液中也有目的蛋白（带6个His-tag），感觉不挂柱，纯化的时候洗了好多梯度，蛋白还是很杂。
小白入门，求大神指点
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静心尽力
1楼 2018-07-19 15:49:07
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寻一束光

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 明明就之杪 at 2018-08-20 11:36:42
你好，我想问你的蛋白是什么性质的呢？

是一个蛋白激酶
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静心尽力
5楼2018-08-21 19:41:38
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圣混沌凡

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-25 04:04:55
寻一束光: 金币+10 2018-08-21 19:42:03
1，2两点不确定，但第三点可能是由于破菌不彻底造成的，在裂解菌液后会释放出大量的核酸，这些核酸需要尽可能的打断，不然就会造成破菌后菌液粘稠。
这些粘稠的核酸会影响挂柱效果。
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2楼2018-07-24 23:20:10
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明明就之杪

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2018-08-20 11:36:42
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寻一束光

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 圣混沌凡 at 2018-07-24 23:20:10
1，2两点不确定，但第三点可能是由于破菌不彻底造成的，在裂解菌液后会释放出大量的核酸，这些核酸需要尽可能的打断，不然就会造成破菌后菌液粘稠。
这些粘稠的核酸会影响挂柱效果。

感谢回复，高压1000pa,破碎的4次，网上说破碎太多，蛋白不是也会被破坏，所以就不敢破碎那么多次，我准备加点核酸酶试试~
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静心尽力
4楼2018-08-21 19:40:59
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