应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于杆状病毒表达系统的一些问题？
81/1返回列表
查看: 2979  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

寻一束光

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于杆状病毒表达系统的一些问题？ 已有1人参与

关于杆状病毒表达系统的一些问题？
1.如果我不测滴度的话，按照理论P3滴度是不是大于1X108了，那么我表达蛋白的时候能不能就按照1X108，MOI值5 来计算病毒加入的量，这样对表达量影响大么？
2.收菌的时间是48-72h,72h的时候已经有一些细胞破碎了，细胞活力在70-80%，我看手册上说，“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”是不是说收获的时候细胞活力只有20%，那岂不是很多细胞都破碎了，蛋白不就被降解了么？文献又有说细胞活力在90%的时候收，所以我就很困惑，什么时间收比较好
3.表达后，菌液高压破碎后特别稠，堵柱子，流过液中也有目的蛋白（带6个His-tag），感觉不挂柱，纯化的时候洗了好多梯度，蛋白还是很杂。
小白入门，求大神指点
回复此楼

» 猜你喜欢
静心尽力
1楼 2018-07-19 15:49:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圣混沌凡

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-07-25 04:04:55
寻一束光: 金币+10 2018-08-21 19:42:03
1，2两点不确定，但第三点可能是由于破菌不彻底造成的，在裂解菌液后会释放出大量的核酸，这些核酸需要尽可能的打断，不然就会造成破菌后菌液粘稠。
这些粘稠的核酸会影响挂柱效果。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2018-07-24 23:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

明明就之杪

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2018-08-20 11:36:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寻一束光

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 圣混沌凡 at 2018-07-24 23:20:10
1，2两点不确定，但第三点可能是由于破菌不彻底造成的，在裂解菌液后会释放出大量的核酸，这些核酸需要尽可能的打断，不然就会造成破菌后菌液粘稠。
这些粘稠的核酸会影响挂柱效果。

感谢回复，高压1000pa,破碎的4次，网上说破碎太多，蛋白不是也会被破坏，所以就不敢破碎那么多次，我准备加点核酸酶试试~
赞一下 回复此楼
静心尽力
4楼2018-08-21 19:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寻一束光

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 明明就之杪 at 2018-08-20 11:36:42
你好，我想问你的蛋白是什么性质的呢？

是一个蛋白激酶
回复此楼
静心尽力
5楼2018-08-21 19:41:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

digimanual

新虫 (初入文坛)
1、滴度对蛋白表达的影响没那么大，实验用的蛋白你估计一下MOI就足够了。大不了你感染两份，滴度相差5倍。
2、我的经验感染后4-5天外源蛋白才到最高值，3天还是太早了。你说的细胞裂解的很厉害，我推测是病毒加的太多了。表达时间你可以看看这里的照片：bacmid.com
3、我都是用超声波破碎细胞，还没遇到你说的粘稠的情况。另外，上柱子的时候你把细胞裂解液弄稀一些，我觉得你的样品太浓了。
赞一下 回复此楼
6楼2018-09-15 13:23:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SivanLi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 寻一束光 at 2018-08-21 19:40:59
感谢回复，高压1000pa,破碎的4次，网上说破碎太多，蛋白不是也会被破坏，所以就不敢破碎那么多次，我准备加点核酸酶试试~...

想问一下阿婆主菌液浓稠堵柱子的问题用上述的方法解决了吗？我也遇到了这个问题，谢谢阿婆主了
赞一下 回复此楼
7楼2018-11-27 21:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水晶蛋蛋

铜虫 (小有名气)
1.“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”这里说的是胞内表达
2.文献又有说细胞活力在90%的时候收。这里说的是分泌表达
每种情况不一样所以对细胞活力的要求不一样。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2019-10-09 12:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 寻一束光 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 评审有感 +3 popular289 2026-05-18 6/300 2026-05-18 15:17 by gy116024
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +7 1234567wang 2026-05-17 8/400 2026-05-18 15:07 by gy116024
[硕博家园] 考博自荐 +5 科研狗111 2026-05-13 6/300 2026-05-18 11:22 by 糊糊涂涂好
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ky2p12rrjj 2026-05-15 4/200 2026-05-17 19:47 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 xx7gd5zq4e 2026-05-15 6/300 2026-05-17 19:36 by Equinoxhua
[考博] 找博士生导师 +4 小代想上岸 2026-05-15 5/250 2026-05-17 17:44 by 脱颖而出
[考博] 26/27博士推荐 +3 1木头人13949 2026-05-13 3/150 2026-05-17 09:41 by YuY66
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 v9tggjlwd0 2026-05-15 4/200 2026-05-17 08:06 by 11n4dfd8yn
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-17 07:31 by 11n4dfd8yn
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-17 07:16 by 11n4dfd8yn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-17 07:11 by 11n4dfd8yn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k37jurhrau 2026-05-16 4/200 2026-05-17 01:35 by ue3ir18jc3
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ky2p12rrjj 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:57 by ue3ir18jc3
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 x0mp7owy2b 2026-05-15 4/200 2026-05-17 00:25 by ue3ir18jc3
[高分子] 本人最近太闲了，谁有问题可以提，每天会统一回复 +9 一切都是空工 2026-05-12 20/1000 2026-05-16 19:52 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k37jurhrau 2026-05-16 3/150 2026-05-16 13:57 by vcdazktkjx
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 6/300 2026-05-16 11:29 by h3oerqvkv9
[硕博家园] 申请博士 +3 呃?呃 2026-05-15 3/150 2026-05-16 11:01 by a4742549
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭