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muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 扩增基因回收问题

我用的是高保真酶扩增的,扩完后用琼脂糖胶回收,点2 微升很亮,然后再加A尾,每样品4管,每管10微升的体系,72°c 30分钟后,用试剂盒回收,点2 微升没任何条带,只有Marker,然后再点5微升,一样没发现条带。这是怎么回事呢?
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biogate21

铁虫 (正式写手)

★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢! 3-31 14:36
柱子回收的效率太低,可以试试溶液回收,还可一实行忙连
2楼2009-03-31 09:27:19
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朱静华

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢! 3-31 14:36
muchong5577(金币+2,VIP+0):再次谢了 3-31 23:18
加A之后直接连接就可以了,为什么还要回收呢?我也是和楼主做法一样的,但是加A后我没有回收检验,直接做了接下来的连接转化,挑到了转化子
3楼2009-03-31 10:33:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢! 3-31 14:36
现在TA克隆已经很少有人用了
我倒是建议用双酶切克隆
4楼2009-03-31 11:44:40
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muchong5577

金虫 (正式写手)

呵呵  谢谢大家
5楼2009-03-31 14:39:50
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zzm7806

我做的时候是扩增完直接加A尾,然后跑电泳,回收一次。连接T载体,也挑到阳性转化了。
6楼2009-03-31 15:35:00
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