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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 扩增基因回收问题
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muchong5577

金虫 (正式写手)

[交流] 扩增基因回收问题

我用的是高保真酶扩增的，扩完后用琼脂糖胶回收，点2 微升很亮，然后再加A尾，每样品4管，每管10微升的体系，72°c 30分钟后，用试剂盒回收，点2 微升没任何条带，只有Marker，然后再点5微升，一样没发现条带。这是怎么回事呢？
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1楼 2009-03-31 09:09:38
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biogate21

铁虫 (正式写手)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢！ 3-31 14:36
柱子回收的效率太低，可以试试溶液回收，还可一实行忙连
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2楼2009-03-31 09:27:19
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朱静华

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢！ 3-31 14:36
muchong5577(金币+2,VIP+0):再次谢了 3-31 23:18
加A之后直接连接就可以了，为什么还要回收呢？我也是和楼主做法一样的，但是加A后我没有回收检验，直接做了接下来的连接转化，挑到了转化子
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3楼2009-03-31 10:33:00
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
muchong5577(金币+1,VIP+0):谢谢！ 3-31 14:36
现在TA克隆已经很少有人用了
我倒是建议用双酶切克隆
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4楼2009-03-31 11:44:40
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muchong5577

金虫 (正式写手)
呵呵  谢谢大家
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5楼2009-03-31 14:39:50
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zzm7806

我做的时候是扩增完直接加A尾，然后跑电泳，回收一次。连接T载体，也挑到阳性转化了。
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6楼2009-03-31 15:35:00
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