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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于重组大肠杆菌发酵大生产质粒无法诱导的问题
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b05340123

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于重组大肠杆菌发酵大生产质粒无法诱导的问题 已有1人参与

小弟最近在做一个酶发酵，质粒载体是pET-24a，表达菌BL21，在摇瓶中小试（低密度）表达酶活大概在100-150U/g左右。之后转入10吨发酵罐中生产（补料高密度），酶活一直稳定在50U/g左右。
       之前怀疑一：质粒丢失问题。利用药典的方法检测了三批生产的放罐样（对照为摇瓶），质粒丢失率10%-20%，与对照差不多。
              怀疑二：质粒未诱导。生产使用的IPTG为工业级，罐上诱导浓度0.4mM。这个浓度也拿来在摇瓶中做过实验，确定本身没问题。
当然，质粒未诱导的因素很多。因此想请教论坛大神，发生这个问题主要原因是什么？是不是还有其他方面的因素导致酶活低？谢谢！
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1楼 2018-07-11 09:14:31
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Mr-春哥

新虫 (小有名气)
克隆基因的时候有没有考虑到移码突变问题？

发自小木虫Android客户端
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宽容而不懦弱，平凡而不平庸
2楼2018-07-11 09:17:55
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b05340123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Mr-春哥 at 2018-07-11 09:17:55
克隆基因的时候有没有考虑到移码突变问题？

测序都确认过没问题
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3楼2018-07-11 10:27:48
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lxw_2010

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

发酵时间是多少，有没有做过蛋白表达及酶活的timecourse。
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4楼2018-07-31 14:41:51
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