| 查看: 2493 | 回复: 3 | ||
[求助]
关于重组大肠杆菌发酵大生产质粒无法诱导的问题 已有1人参与
|
|
小弟最近在做一个酶发酵，质粒载体是pET-24a，表达菌BL21，在摇瓶中小试（低密度）表达酶活大概在100-150U/g左右。之后转入10吨发酵罐中生产（补料高密度），酶活一直稳定在50U/g左右。 之前怀疑一：质粒丢失问题。利用药典的方法检测了三批生产的放罐样（对照为摇瓶），质粒丢失率10%-20%，与对照差不多。 怀疑二：质粒未诱导。生产使用的IPTG为工业级，罐上诱导浓度0.4mM。这个浓度也拿来在摇瓶中做过实验，确定本身没问题。 当然，质粒未诱导的因素很多。因此想请教论坛大神，发生这个问题主要原因是什么？是不是还有其他方面的因素导致酶活低？谢谢！  |
回复此楼» 猜你喜欢
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner
已经有0人回复
-
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有272人回复
-
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner
已经有0人回复
-
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner
已经有0人回复
-
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂
已经有0人回复
-
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner
已经有0人回复
-
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗
已经有0人回复
-
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner
已经有0人回复
-
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
Mr-春哥
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 965.6
- 散金: 66
- 帖子: 257
- 在线: 14.8小时
- 虫号: 7211305
- 注册: 2017-09-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2018-07-11 09:17:55
3楼2018-07-11 10:27:48
4楼2018-07-31 14:41:51