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关于重组大肠杆菌发酵大生产质粒无法诱导的问题 已有1人参与
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小弟最近在做一个酶发酵，质粒载体是pET-24a，表达菌BL21，在摇瓶中小试（低密度）表达酶活大概在100-150U/g左右。之后转入10吨发酵罐中生产（补料高密度），酶活一直稳定在50U/g左右。 之前怀疑一：质粒丢失问题。利用药典的方法检测了三批生产的放罐样（对照为摇瓶），质粒丢失率10%-20%，与对照差不多。 怀疑二：质粒未诱导。生产使用的IPTG为工业级，罐上诱导浓度0.4mM。这个浓度也拿来在摇瓶中做过实验，确定本身没问题。 当然，质粒未诱导的因素很多。因此想请教论坛大神，发生这个问题主要原因是什么？是不是还有其他方面的因素导致酶活低？谢谢！  |
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