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ncuskywj

铁虫 (初入文坛)

[求助] OPA法测蛋白质自由氨基,样品自身有颜色影响测定怎么办已有2人参与

根据OPA法侧自由氨基是根据 OPA在β-巯基乙醇的存在下与自由氨基形成黄色化合物,在340nm有特征峰。但我的蛋白与其他物质形成的复合物 有颜色,我直接测了下340nm的吸光度值,本身有很高的吸光度值。自身的颜色感觉对最后的测定有影响,请问下这种情况怎么去测定自由氨基的含量
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总掉链的小孩

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 灯火迷离汤 at 2020-12-09 22:25:19
同学你好,我最近也在做接枝度的实验,请问一下你的样品跟opa试剂混合后是呈现黄色吗,为什么我的是无色,而且测得接枝度是负值

同学请问你解决了吗,我的测出来也是负数,求赐教

发自小木虫IOS客户端
10楼2021-04-05 23:28:10
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wzx323

铁虫 (正式写手)

你做一个加了样品样品但没有加显色剂的样品控制组

发自小木虫Android客户端
奔跑吧蜗牛
2楼2018-07-04 23:22:44
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ncuskywj

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wzx323 at 2018-07-04 23:22:44
你做一个加了样品样品但没有加显色剂的样品控制组

我的是40mgOPA+25ml硼砂溶液+100uL β-巯基乙醇+2.5mLde  20%SDS.混匀后定容到50ml。。 然后在样品+4ml的这个OPA试剂。OPA法的显色剂是β-巯基乙醇吗?如果是的话就用水代替吗?
3楼2018-07-06 16:04:39
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qzhwxli

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我看到的资料(NOVO, OPA method)里是用的 DTT(dithiothreitol)。

背景颜色太深,可不可以就直接把背景当成空白?
4楼2018-07-10 16:02:09
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