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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » OPA法测蛋白质自由氨基，样品自身有颜色影响测定怎么办
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ncuskywj

铁虫 (初入文坛)

[求助] OPA法测蛋白质自由氨基，样品自身有颜色影响测定怎么办 已有2人参与

根据OPA法侧自由氨基是根据 OPA在β-巯基乙醇的存在下与自由氨基形成黄色化合物，在340nm有特征峰。但我的蛋白与其他物质形成的复合物 有颜色，我直接测了下340nm的吸光度值，本身有很高的吸光度值。自身的颜色感觉对最后的测定有影响，请问下这种情况怎么去测定自由氨基的含量
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1楼 2018-07-04 15:47:19
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wzx323

铁虫 (正式写手)
你做一个加了样品样品但没有加显色剂的样品控制组

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奔跑吧蜗牛
2楼2018-07-04 23:22:44
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ncuskywj

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wzx323 at 2018-07-04 23:22:44
你做一个加了样品样品但没有加显色剂的样品控制组

我的是40mgOPA+25ml硼砂溶液+100uL β-巯基乙醇+2.5mLde  20%SDS.混匀后定容到50ml。。 然后在样品+4ml的这个OPA试剂。OPA法的显色剂是β-巯基乙醇吗？如果是的话就用水代替吗？
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3楼2018-07-06 16:04:39
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qzhwxli

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我看到的资料（NOVO， OPA method）里是用的 DTT（dithiothreitol）。

背景颜色太深，可不可以就直接把背景当成空白？
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4楼2018-07-10 16:02:09
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ncuskywj

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qzhwxli at 2018-07-10 16:02:09
我看到的资料（NOVO， OPA method）里是用的 DTT（dithiothreitol）。

背景颜色太深，可不可以就直接把背景当成空白？

有用 DTT的  也有β-巯基乙醇的，我现在是打算拿样品背景来扣空白。但是样品溶解在OPA溶液里面。所有的空白对照 是样品加在没有加opa试剂的溶液中么
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5楼2018-07-11 16:50:22
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跑步的苹果

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ncuskywj at 2018-07-06 16:04:39
我的是40mgOPA+25ml硼砂溶液+100uL β-巯基乙醇+2.5mLde  20%SDS.混匀后定容到50ml。。 然后在样品+4ml的这个OPA试剂。OPA法的显色剂是β-巯基乙醇吗？如果是的话就用水代替吗？...

我用的这个测得是蛋白质浓度

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6楼2018-07-18 22:19:51
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gdm考研

新虫 (著名写手)
你好，你们这种测试能测气凝胶材料的自由氨基吗

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7楼2018-07-31 16:24:56
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L爱笑的琳

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ncuskywj at 2018-07-06 16:04:39
我的是40mgOPA+25ml硼砂溶液+100uL β-巯基乙醇+2.5mLde  20%SDS.混匀后定容到50ml。。 然后在样品+4ml的这个OPA试剂。OPA法的显色剂是β-巯基乙醇吗？如果是的话就用水代替吗？...

请问你配制20%SDS会起泡沫吗，怎么处理
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8楼2018-09-07 08:28:47
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灯火迷离汤

铁虫 (初入文坛)
同学你好，我最近也在做接枝度的实验，请问一下你的样品跟opa试剂混合后是呈现黄色吗，为什么我的是无色，而且测得接枝度是负值
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如果我们知道我们在做什么，那就不叫研究了，对吗？
9楼2020-12-09 22:25:19
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总掉链的小孩

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 灯火迷离汤 at 2020-12-09 22:25:19
同学你好，我最近也在做接枝度的实验，请问一下你的样品跟opa试剂混合后是呈现黄色吗，为什么我的是无色，而且测得接枝度是负值

同学请问你解决了吗，我的测出来也是负数，求赐教

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10楼2021-04-05 23:28:10
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