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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 分离纯化天然植物蛋白
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小木鱼er

新虫 (初入文坛)

[求助] 分离纯化天然植物蛋白 已有1人参与

请教：
我在做天然蛋白的分离纯化，用的是C18色谱柱，基本上前10分钟就以及完全出峰，记得目标峰最好不要在前10分钟的，有什么解决办法吗？
检测波长是215、254和280，是不是280就可以了，可是我的蛋白在280响应很低，远比不上215，215分离效果又不好，还有倒峰；
用C18制备柱收集馏分并透析冻干后，无法复溶，有什么办法在不使蛋白变性的情况下使其复溶的吗，我后面要做活性鉴定的，十分感谢！！@xiaoamuchong
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1楼 2018-06-30 21:58:54
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hyh199112

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
前10分钟跑完全部峰，你考虑跑过电泳么？看看分子量的范围，或者是不是没有加TFA
有没有做全波长扫描？看看峰主要在哪边
很难复融，如果不做结构鉴定，就是只做下生物活性你可以考虑加buffer,好像叫SD之类的，具体我忘记了，
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2楼2018-07-02 22:55:55
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小木鱼er

新虫 (初入文坛)
跑过电泳，跑几次180kD的也有，挺多条带的，流动相加了三氟乙酸的，没有做全波长。洗脱梯度20-90，后来前面加上10%的梯度，峰倒是在10分钟后出了，现在关键是蛋白冻干后就溶不了。感谢您，被嘲笑了，好心塞

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3楼2018-07-03 10:30:31
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