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小木鱼er

新虫 (初入文坛)

[求助] 分离纯化天然植物蛋白已有1人参与

请教:
我在做天然蛋白的分离纯化,用的是C18色谱柱,基本上前10分钟就以及完全出峰,记得目标峰最好不要在前10分钟的,有什么解决办法吗?
检测波长是215、254和280,是不是280就可以了,可是我的蛋白在280响应很低,远比不上215,215分离效果又不好,还有倒峰;
用C18制备柱收集馏分并透析冻干后,无法复溶,有什么办法在不使蛋白变性的情况下使其复溶的吗,我后面要做活性鉴定的,十分感谢!!@xiaoamuchong
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hyh199112

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
前10分钟跑完全部峰,你考虑跑过电泳么?看看分子量的范围,或者是不是没有加TFA
有没有做全波长扫描?看看峰主要在哪边
很难复融,如果不做结构鉴定,就是只做下生物活性你可以考虑加buffer,好像叫SD之类的,具体我忘记了,
2楼2018-07-02 22:55:55
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小木鱼er

新虫 (初入文坛)

跑过电泳,跑几次180kD的也有,挺多条带的,流动相加了三氟乙酸的,没有做全波长。洗脱梯度20-90,后来前面加上10%的梯度,峰倒是在10分钟后出了,现在关键是蛋白冻干后就溶不了。感谢您,被嘲笑了,好心塞

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-07-03 10:30:31
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