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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 启动子扩增求助
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Lee ?

新虫 (初入文坛)

[求助] 启动子扩增求助 已有1人参与

最近想扩增一个基因的启动子，参考基因组序列已经知道，设计了很多对引物，序列长度2000~3000左右，但扩增结果基本上都是500bp的产物或者没有条带，AT含量很高，基本都在75%，求助有什么好的解决方案？扩了好久，真的没有办法～谢谢

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1楼 2018-06-20 15:56:31
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学无止境111

新虫 (正式写手)
引物序列太长了

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2楼2018-06-20 15:59:48
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Lee ?

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 学无止境111 at 2018-06-20 15:59:48
引物序列太长了

不长啊，18~24bp

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3楼2018-06-20 16:09:54
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学无止境111

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Lee ? at 2018-06-20 16:09:54
不长啊，18~24bp
...

奥，看错了。
1.检查一下引物与序列之间有没有其他的互补区。
2.调整一下pcr扩增时间和温度
3.换个效率高的酶
4.给我金币攒人品

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4楼2018-06-20 17:35:19
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蝶恋花5280

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-06-21 13:42:33
你不妨把下游引物放到起始密码子后面，因为引物在起始转录位点附近确实不好p
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5楼2018-06-20 18:54:19
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du20131580

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-06-21 13:42:18
下游引物放atg后面确实好扩一点，先把大片断扩出来，然后再设计引物扩启动子区，能增加引物特异性。我之前的2000左右的启动子也是这么扩出来的。

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6楼2018-06-20 19:47:49
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