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yuruj金虫 (正式写手)
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透明质酸酶抑制实验——请问有人成功完成透明质酸酶的抑制实验吗？求指点关键步骤！已有3人参与
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各位虫友，请问有人成功完成透明质酸酶的抑制实验吗？求指点关键步骤！ 本人用的是以下方法：取0. 1mLCaCl2 溶液( 0. 25mmol/ L) 和0. 5mL 透明质酸酶液37℃ 保温培养20min; 加入样品液0. 5mL,37℃ 保温培养20min; 加入0. 5mL透明质酸钠液37℃􀀁 保温30min, 常温放置5min; 加入0. 1mLN aOH 溶液( 0. 4mol/ L) 和0. 5mL乙酰丙酮溶液, 置于沸水浴中加热15min 后立即冷却5min; 加入埃尔利希试剂1. 0mL 并用3. 0mL 无水乙醇进行稀释,放置20min 显色, 测定吸光度。 透明质酸酶抑制率( %) =( A- B) - ( C- D)/(A- B)* 100% ( 式中: A 为对照溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替样品溶液) ; B 为对照空白溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液) ; C 为试样溶液A BS 值; D 为试样空白溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替酶液) 。 最终结果是A、B、C、D吸光值均很低，相差不大。 我在考虑是否该反应未发生？ |
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