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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 透明质酸酶抑制实验——请问有人成功完成透明质酸酶的抑制实验吗？求指点关键步骤！
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yuruj

金虫 (正式写手)

[求助] 透明质酸酶抑制实验——请问有人成功完成透明质酸酶的抑制实验吗？求指点关键步骤！ 已有3人参与

各位虫友，请问有人成功完成透明质酸酶的抑制实验吗？求指点关键步骤！
本人用的是以下方法：取0. 1mLCaCl2 溶液( 0. 25mmol/ L) 和0. 5mL 透明质酸酶液37℃ 保温培养20min; 加入样品液0. 5mL,37℃ 保温培养20min; 加入0. 5mL透明质酸钠液37℃􀀁 保温30min, 常温放置5min; 加入0. 1mLN aOH 溶液( 0. 4mol/ L) 和0. 5mL乙酰丙酮溶液, 置于沸水浴中加热15min 后立即冷却5min;
加入埃尔利希试剂1. 0mL 并用3. 0mL 无水乙醇进行稀释,放置20min 显色, 测定吸光度。                                                                                                               透明质酸酶抑制率( %) =( A- B) - ( C- D)/(A- B)* 100% (
式中: A 为对照溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替样品溶液) ; B 为对照空白溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液) ; C 为试样溶液A BS 值; D 为试样空白溶液ABS 值( 用醋酸缓冲溶液代替酶液) 。
最终结果是A、B、C、D吸光值均很低，相差不大。
我在考虑是否该反应未发生？
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1楼 2018-06-08 16:25:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-11 12:55:36
混匀了，请问你做这个反应，吸光度能达到多少呢？

我现在是用CTAB来做透明质酸酶抑制的，直接上的酶标仪，拿到数据直接套公式就得出抑制率了，现在问我吸光度我也不清楚。
你用的DMAB法在乙酰丙酮溶液, 置于沸水浴中加热15min，把水浴时间增加到30~60min试试。你的有些试剂浓度跟我用的不太一样，不过应该问题不大。
建议你可以用甘草酸二钾做个阳性对照再试试
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yuruj
4楼2018-06-11 14:20:18
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小福包56

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我前阵子做了那个实验的。我的经验是得注意一下显色剂的颜色，显色剂的颜色深了之后才能让显色后出现更深的颜色。
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向世界伸出圆手
11楼2018-06-12 16:42:33
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周长江

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

参考这里： http://www.dxy.cn/bbs/thread/6562018#6562018
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13楼2018-06-14 09:29:14
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yuruj

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
14楼: Originally posted by 小福包56 at 2018-06-14 15:46:36
是成功了的。显色剂的确是实验前配制的，emmm不配制也没办法用呀...

也是用我这个方法吗？加样和不加样的吸光度相差大吗？我的ABCD四个值都差不多，感觉是反应没进行，而且吸光值很低，在0.1-0.2之间。方便的话是否能发个实验方案给我参考一下呢，非常感谢，邮箱978643934@qq.com
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15楼2018-06-15 13:33:22
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来修

新虫 (初入文坛)
楼主现在做出来了吗，我今天做了那个实验结果特奇怪

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23楼2019-08-09 12:49:59
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普通回帖

自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)
每次加试液后混匀了没？？充分混匀。。。  再就是看看管子洗干净了没
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2楼2018-06-11 10:09:35
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yuruj

金虫 (正式写手)
混匀了，请问你做这个反应，吸光度能达到多少呢？

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3楼2018-06-11 12:55:36
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yuruj

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 自由的风gaga at 2018-06-11 14:20:18
我现在是用CTAB来做透明质酸酶抑制的，直接上的酶标仪，拿到数据直接套公式就得出抑制率了，现在问我吸光度我也不清楚。
你用的DMAB法在乙酰丙酮溶液, 置于沸水浴中加热15min，把水浴时间增加到30~60min试试。你的 ...

好的，谢谢！我试试。以后请多多指教！

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5楼2018-06-11 15:33:21
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自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-11 15:33:21
好的，谢谢！我试试。以后请多多指教！
...

你是做化妆品行业的吧？？
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6楼2018-06-11 16:31:36
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yuruj

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 自由的风gaga at 2018-06-11 16:31:36
你是做化妆品行业的吧？？...

是的

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7楼2018-06-11 18:45:31
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自由的风gaga

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-11 18:45:31
是的
...

很巧啊，我也是。以后多多交流哈
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8楼2018-06-12 08:44:01
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yuruj

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 自由的风gaga at 2018-06-12 08:44:01
很巧啊，我也是。以后多多交流哈...

好的
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9楼2018-06-12 11:53:27
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yuruj

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yuruj at 2018-06-12 11:53:27
好的...

对了，我给你发了站内短消息，想了解一下CTAB法，据我查阅文献，发现CATB法只能测透明质酸（透明质酸钠）的含量，你是如何用来测透明质酸酶的抑制率呢？
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10楼2018-06-12 12:00:38
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