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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 左右同源臂
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Tdftdf

新虫 (初入文坛)

[交流] 左右同源臂 已有5人参与

我P同源臂老是P不出来，P出来条带大小一直是引物的大小，想请问一下除了我的DNA有问题外，还有什么问题会造成这种情况吗？我引物换了一个也是P不出来

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1楼 2018-06-06 16:42:54
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懒懒姑娘

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我做QPCR时也是好多引物二聚体，当时我提高了退火温度，就好多了

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2楼2018-06-06 17:09:40
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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3楼2018-06-06 17:35:19
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Tdftdf

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 懒懒姑娘 at 2018-06-06 17:09:40
我做QPCR时也是好多引物二聚体，当时我提高了退火温度，就好多了

好的，谢谢，我试试

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4楼2018-06-06 18:52:06
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Tdftdf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Tdftdf at 2018-06-06 18:52:06
好的，谢谢，我试试
...

想P出2kb左右的条带一般用什么酶呀，直接用mix可以吗？

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5楼2018-06-06 19:34:14
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
★
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5楼: Originally posted by Tdftdf at 2018-06-06 19:34:14
想P出2kb左右的条带一般用什么酶呀，直接用mix可以吗？
...

可以的，我用的mix特异性特别高

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6楼2018-06-06 22:58:08
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diaomou

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同源臂扩增干什么用的

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7楼2018-06-07 00:10:34
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soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
★
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同源臂扩增不出来，如果引物序列没问题（设计和合成）的话，多半是模板问题。
一般的PCR mix 扩增2kb都没有问题，当然，最好是invitrogen，QiaGen，NEB，Promega，Biorad，takara这些公司的mix，比较靠谱
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8楼2018-06-07 03:46:11
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Tdftdf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by diaomou at 2018-06-07 00:10:34
同源臂扩增干什么用的

做敲除

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9楼2018-06-11 15:13:22
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Tdftdf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Tdftdf at 2018-06-06 18:52:06
好的，谢谢，我试试
...

你引物的TM值是多大呀？

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10楼2018-06-11 15:15:01
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