24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

» 猜你喜欢

售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急已经有5人回复
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急已经有5人回复
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急已经有3人回复
面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数已经有13人回复
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急已经有8人回复
两块石头已经有8人回复
初秋的晨风已经有6人回复
学科评审组评审是指会评吗？已经有9人回复
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急已经有14人回复
广西大学-广州大学招聘博士后欢迎广大优秀人才！！！已经有7人回复

1楼 2018-06-05 09:33:56

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

专家经验: +702
BioEPI: 1
应助: 517 (博士)
金币: 467.7
散金: 18028
红花: 313
帖子: 3594
在线: 518.9小时
虫号: 4027804
注册: 2015-08-18
性别: GG
专业: 核技术及其应用
管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

a.水洗
用5-10CV纯化水以0.5ml/min(HT 1ml)或2.0ml/min(HT 5ml)清洗介质。
备注：此步骤用于去除介质中20%乙醇。
b.平衡
用5-10CV平衡液以0.5ml/min(HT 1ml)或2.0ml/min(HT 5ml)平衡介质，直至基线平稳后调零。
备注：此步骤用于平衡介质，保证介质中的溶液的组分和pH与样本一致。
c.上样
上样前务必要确认样本溶液的pH在6.5-8.0范围内，再经过离心、过滤（0.45um）后以0.2ml/min(1ml)或1.0ml/min(5ml)进行上样，上样完成后用平衡液进清洗直至基线为零。
备注：蛋白的结合能力随着裂解物类型、目标蛋白性质、流速、温度、pH变化而变化，低流速常常能增加样本的结合效率。
d.洗脱
用5-10CV洗脱液以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)进行洗脱，并收集洗脱液。
备注：低流速常常能增加洗脱液中目标蛋白的浓度。
e.水洗
用5-10CV纯化水以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)清洗介质。
备注：此步骤用于去除介质中洗脱液。
f.保存
用5-10CV 20%乙醇以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)清洗介质后保存。
备注：20%乙醇可以防止微生物的生长，20%乙醇保存的介质可以在4-30℃（4-8℃更佳）保存。

g.溶液配制
平衡液：0.14M NaCl、0.0027M KCl、0.01M Na2HPO4、0.0018M KH2PO4，调节pH 7.3，室温保存。
备注：平衡液配制完成后务必确保pH为7.3，当样本所在溶液的pH<6.5或pH>8.0时，样本与介质作用较弱甚至是无效的。
洗脱液：0.05M Tris-HCl、0.01M GSH，调节pH 8.0，4℃保存。
备注：洗脱液要求现配现用；也可以先配制0.05M Tris-HCl，pH 8.0在4℃保存，使用前再加入GSH并调整pH为8.0（加入GSH后，pH会降低）。