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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » Sepharose CL-6B凝胶填料使用方法
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sunsun923

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2018-06-05 09:33:56
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547star

木虫 (著名写手)
网络看到过有装柱视频，好像是GE提供的。你可以找找看。
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为什么
2楼2018-06-05 10:21:25
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)
不有说明书吗

发自小木虫Android客户端
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3楼2018-06-05 10:25:55
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sunsun923

禁虫 (初入文坛)
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4楼2018-06-05 11:12:11
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
a.水洗
用5-10CV纯化水以0.5ml/min(HT 1ml)或2.0ml/min(HT 5ml)清洗介质。
备注：此步骤用于去除介质中20%乙醇。
b.平衡
用5-10CV平衡液以0.5ml/min(HT 1ml)或2.0ml/min(HT 5ml)平衡介质，直至基线平稳后调零。
备注：此步骤用于平衡介质，保证介质中的溶液的组分和pH与样本一致。
c.上样
上样前务必要确认样本溶液的pH在6.5-8.0范围内，再经过离心、过滤（0.45um）后以0.2ml/min(1ml)或1.0ml/min(5ml)进行上样，上样完成后用平衡液进清洗直至基线为零。
备注：蛋白的结合能力随着裂解物类型、目标蛋白性质、流速、温度、pH变化而变化，低流速常常能增加样本的结合效率。
d.洗脱
用5-10CV洗脱液以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)进行洗脱，并收集洗脱液。
备注：低流速常常能增加洗脱液中目标蛋白的浓度。
e.水洗
用5-10CV纯化水以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)清洗介质。
备注：此步骤用于去除介质中洗脱液。
f.保存
用5-10CV 20%乙醇以0.5ml/min(1ml)或2.0ml/min(5ml)清洗介质后保存。
备注：20%乙醇可以防止微生物的生长，20%乙醇保存的介质可以在4-30℃（4-8℃更佳）保存。

g.溶液配制
平衡液：0.14M NaCl、0.0027M KCl、0.01M Na2HPO4、0.0018M KH2PO4，调节pH 7.3，室温保存。
备注：平衡液配制完成后务必确保pH为7.3，当样本所在溶液的pH<6.5或pH>8.0时，样本与介质作用较弱甚至是无效的。
洗脱液：0.05M Tris-HCl、0.01M GSH，调节pH 8.0，4℃保存。
备注：洗脱液要求现配现用；也可以先配制0.05M Tris-HCl，pH 8.0在4℃保存，使用前再加入GSH并调整pH为8.0（加入GSH后，pH会降低）。
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5楼2018-06-06 16:38:37
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sunsun923

禁虫 (初入文坛)
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6楼2018-06-07 09:28:48
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

这种填料常压柱就可以，装柱很简单，就是把清洗抽干的填料和脱气处理的缓冲液3:1混成匀浆，然后缓慢加入常压柱，注意不要产生气泡。
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7楼2018-06-08 09:34:43
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