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证明tf-8蛋白特异性识别并结合rod基因启动子区的tgtctc序列试验的设计
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2楼2018-06-04 23:37:12
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类似的: 二、试验步骤 1 定点突变ROD基因启动子区的TGTCTC序列 首先设计两条引物,使引物覆盖ROD基因启动子区的突变位点TGTCTC,将该序列突变为其他碱基;以ROD基因为模板进行PCR扩增。PCR扩增后得到的片段与模板片段之间只在TGTCTC处有差异。 PCR得到的产物为一个缺刻质粒,用该缺刻质粒转化大肠杆菌,大肠杆菌会补齐缺口,并获得突变基因。可以通过测序的方法判断是否完成突变;也可在其未突变前与一个报告基因连接,PCR突变后,如果报告基因表达,则证明突变失败,反之,报告基因不表达,则证明突变成功。 2 进行EMSA试验 制备用32P标记过的标记探针:Labeled probe;无标记的核酸探针:Non-labeled probe;用32P标记过的突变探针:Labeled mut-probe;目标蛋白:Nucleoprotein;目标蛋白抗体:TF-8 antibody。 将以上样品及对照处理后,进行凝胶电泳实验,电泳结束后进行放射自显影,并对结果进行分析(本试验为单因素试验,样品浓度应保持一致)。 三、结 发自小木虫Android客户端 |

4楼2018-06-04 23:58:50
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