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aiguer

新虫 (初入文坛)

[交流] 证明tf-8蛋白特异性识别并结合rod基因启动子区的tgtctc序列试验的设计

证明tf-8蛋白特异性识别并结合rod基因启动子区的tgtctc序列试验的设计

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理工学霸

金虫 (小有名气)

hello
2楼2018-06-04 23:37:12
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aiguer

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 理工学霸 at 2018-06-04 23:37:12
先做单杂

急需要试验证明过程

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3楼2018-06-04 23:56:15
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aiguer

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aiguer at 2018-06-04 23:56:15
急需要试验证明过程
...

类似的:
二、试验步骤
1 定点突变ROD基因启动子区的TGTCTC序列
首先设计两条引物,使引物覆盖ROD基因启动子区的突变位点TGTCTC,将该序列突变为其他碱基;以ROD基因为模板进行PCR扩增。PCR扩增后得到的片段与模板片段之间只在TGTCTC处有差异。
PCR得到的产物为一个缺刻质粒,用该缺刻质粒转化大肠杆菌,大肠杆菌会补齐缺口,并获得突变基因。可以通过测序的方法判断是否完成突变;也可在其未突变前与一个报告基因连接,PCR突变后,如果报告基因表达,则证明突变失败,反之,报告基因不表达,则证明突变成功。
2 进行EMSA试验
制备用32P标记过的标记探针:Labeled probe;无标记的核酸探针:Non-labeled probe;用32P标记过的突变探针:Labeled mut-probe;目标蛋白:Nucleoprotein;目标蛋白抗体:TF-8 antibody。
将以上样品及对照处理后,进行凝胶电泳实验,电泳结束后进行放射自显影,并对结果进行分析(本试验为单因素试验,样品浓度应保持一致)。
三、结

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4楼2018-06-04 23:58:50
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倾城一夏

新虫 (初入文坛)

求助:有没有关于这个的文献

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5楼2022-06-07 12:08:10
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倾城一夏

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 理工学霸 at 2018-06-04 23:37:12
先做单杂

想要证明实验过程

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6楼2022-06-07 12:15:05
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