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求助：大豆DNA提取后PCR电泳 目的基因没有条带 请高手指教
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我用CTAB的方法从大豆中提取DNA，然后电泳，发现100bp左右处有亮的条带，预期的DNA处没有条带出现。 提取后，用目的基因引物 cp4 PCR扩增后，也在100bp处出现模糊的条带，没有目的基因的条带出现。请问各位高手会是什么原因？那条亮带会是什么物质的条带，怎样除掉？ [ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:14 ] |
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2楼2009-03-25 19:52:59
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3楼2009-03-25 20:03:12
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Doris1980(金币+2,VIP+0):谢谢 3-26 18:01
Doris1980(金币+2,VIP+0):多谢老兄 3-26 18:04
Doris1980(金币+2,VIP+0):谢谢 3-26 18:01
Doris1980(金币+2,VIP+0):多谢老兄 3-26 18:04
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提取过程出现问题。模板方面的问题可能是以下原因造成： 1、提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应较温和，避免剧烈震荡。 2、由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。 3、玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。因为DNA易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少DNA的损失。 |
4楼2009-03-25 22:55:26
sutao1979
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5楼2009-03-26 05:25:24
aga0110125
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Doris1980(金币+1,VIP+0):xiexie 3-26 18:09
Doris1980(金币+1,VIP+0):xiexie 3-26 18:09
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我用CTAB的方法从大豆中提取DNA，然后电泳，发现100bp左右处有亮的条带，预期的DNA处没有条带出现。 100bp的估计是RNA，试试用RNA酶处理，除此之外没别的带了吗，基因组很大，一般10kb以上吧 不过这么经典的方法还没有提到DNA，真是要好好练练手再做，起码要看到DNA，在PCR吧。 提取后，用目的基因引物 cp4 PCR扩增后，也在100bp处出现模糊的条带，没有目的基因的条带出现。请问各位高手会是什么原因？那条亮带会是什么物质的条带，怎样除掉？ 这里的亮带是引物二聚体可能性较大 |
6楼2009-03-26 09:01:07
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7楼2009-03-26 19:21:52
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xiaoweiwei121
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