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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：大豆DNA提取后PCR电泳 目的基因没有条带 请高手指教
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Doris1980

金虫 (著名写手)

金牌写手

[交流] 求助：大豆DNA提取后PCR电泳 目的基因没有条带 请高手指教

我用CTAB的方法从大豆中提取DNA，然后电泳，发现100bp左右处有亮的条带，预期的DNA处没有条带出现。
     提取后，用目的基因引物 cp4 PCR扩增后，也在100bp处出现模糊的条带，没有目的基因的条带出现。请问各位高手会是什么原因？那条亮带会是什么物质的条带，怎样除掉？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:14 ]
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我只想问，如果我和最亮的那颗星之间有一条路，哪怕只是一条钢索，我会奋力朝它走去么？
1楼 2009-03-25 16:17:11
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gczhang007

银虫 (小有名气)

扩增条件有问题

是不是扩增条件的问题，升高复性温度
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2楼2009-03-25 19:52:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
那些是dimer
引物没设计好吧
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3楼2009-03-25 20:03:12
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357277005

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
Doris1980(金币+2,VIP+0):谢谢 3-26 18:01
Doris1980(金币+2,VIP+0):多谢老兄 3-26 18:04
提取过程出现问题。模板方面的问题可能是以下原因造成：
1、提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应较温和，避免剧烈震荡。
2、由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
3、玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。因为DNA易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少DNA的损失。
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豆豆，可爱的豆豆！
4楼2009-03-25 22:55:26
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
大豆基因组DNA就几百bp？？个人觉得实在是不可能
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会当凌绝顶，一览众山小
5楼2009-03-26 05:25:24
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★
Doris1980(金币+1,VIP+0):xiexie 3-26 18:09
我用CTAB的方法从大豆中提取DNA，然后电泳，发现100bp左右处有亮的条带，预期的DNA处没有条带出现。

100bp的估计是RNA，试试用RNA酶处理，除此之外没别的带了吗，基因组很大，一般10kb以上吧
不过这么经典的方法还没有提到DNA，真是要好好练练手再做，起码要看到DNA，在PCR吧。


     提取后，用目的基因引物 cp4 PCR扩增后，也在100bp处出现模糊的条带，没有目的基因的条带出现。请问各位高手会是什么原因？那条亮带会是什么物质的条带，怎样除掉？

这里的亮带是引物二聚体可能性较大
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6楼2009-03-26 09:01:07
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Doris1980

金虫 (著名写手)
7楼2009-03-26 19:21:52
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Doris1980

金虫 (著名写手)
8楼2009-03-26 19:22:49
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
基因组没有提出来
后边的扩增 基本是引物二聚体
继续提DNA吧
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9楼2009-03-26 23:47:45
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