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Doris1980

金虫 (著名写手)

金牌写手

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虫号: 412381
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专业: 生物化学

[交流] 求助：大豆DNA提取后PCR电泳目的基因没有条带请高手指教

我用CTAB的方法从大豆中提取DNA，然后电泳，发现100bp左右处有亮的条带，预期的DNA处没有条带出现。
提取后，用目的基因引物 cp4 PCR扩增后，也在100bp处出现模糊的条带，没有目的基因的条带出现。请问各位高手会是什么原因？那条亮带会是什么物质的条带，怎样除掉？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-5 at 20:14 ]

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我只想问，如果我和最亮的那颗星之间有一条路，哪怕只是一条钢索，我会奋力朝它走去么？

1楼 2009-03-25 16:17:11

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357277005

金虫 (正式写手)

应助: 51 (初中生)
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红花: 1
帖子: 419
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虫号: 629272
注册: 2008-10-17
专业: 生物化工与食品化工

★ ★ ★ ★
Doris1980(金币+2,VIP+0):谢谢 3-26 18:01
Doris1980(金币+2,VIP+0):多谢老兄 3-26 18:04

提取过程出现问题。模板方面的问题可能是以下原因造成：
1、提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应较温和，避免剧烈震荡。
2、由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
3、玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。因为DNA易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少DNA的损失。