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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

[求助] 核酸酶处理后目的蛋白消失 已有1人参与

我有一个问题,感觉对于过来人来说很简单,但是我陷了进去,想不明白。故在此向各位求助,一起交流。
我的蛋白(VLP)分子筛纯化,电泳检测比较纯,液相凝胶柱检测有两个峰,靠的比较近,差了一分钟,马尔文粒径检测均一。推测有一个是样品峰,另一个是核酸峰,加入核酸酶后发现两个峰都没了,10.5min出现一个很高的峰,对照组核酸酶也在该位置出峰,只不过处理后样品峰远远高于核酸酶峰。故推测VLP降解,通过电泳检测,发现核酸酶条带在18KD左右,目的蛋白没了,反而多了一个比目的蛋白大了两倍的蛋白。
我想问的是:
核酸在蛋白电泳上有条带么;
核酸酶处理后样品电泳检测未发现目的条带,目的蛋白有一个半胱氨酸,可能会形成二硫键,但是电泳前会将样品变性,打开二硫键,为什么出现一个比目的蛋白大了两倍的条带?

@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
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hc-material

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
核酸在蛋白点用上没有条带。
SDS不能破坏二硫键。所以跑电泳之前的破碎,并不能破坏聚体。

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3楼2018-05-21 10:29:54
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
2楼2018-05-21 07:19:38
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-21 10:29:54
核酸在蛋白点用上没有条带。
SDS不能破坏二硫键。所以跑电泳之前的破碎,并不能破坏聚体。

谢谢回复。
但是蛋白上样缓冲液中含有DTT,会打开二硫键。
原样电泳有目的条带;
经过核酸酶处理后的样品,目的条带消失,出现比目的条带大两倍的带。

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
4楼2018-05-21 17:41:27
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