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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 再追加20个金币，求高人帮我解析一下电泳图
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木虫 (职业作家)
模板稀释的不好，引物应该没问题，再检查下缓冲液和跑电泳的时间
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11楼2009-03-25 00:13:17
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)
没有扩出来
建议你把你的基因序列列出来
看看是不是引物不合适
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12楼2009-03-25 00:30:19
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):3Q~ 3-26 15:17
个人认为模板降解的可能性比较大，因为二次pcr是用pcr产物做模板的，pcr产物本身就不稳定，所以再次pcr的时候特别容易出现弥散带，可以用一种高保真的taq酶试试看，另外，如果是模板浓度有问题的话，你可以做一个梯度稀释，一般浓度高容易出现弥散；顺便说一下，第一副电泳图的产物浓度太低了，条带很不清晰（原因很多，引物错配，模板不纯都有可能），用这样的模板很难进行二次pcr的，所以，还是先优化一下第一次pcr，再继续往下做。
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会当凌绝顶，一览众山小
13楼2009-03-25 05:16:25
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jiwu20

铜虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~3Q~ 3-26 15:18
图片中marker右面是二次PCR产物跑的琼脂糖。
二次PCR产物做模板，浓度太高，要稀释至少100倍，稀释以下再试。
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14楼2009-03-25 07:56:47
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zhouquan7175

金虫 (小有名气)
污染了！模板被降解。模板反复冻融也会出现这种情况！
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15楼2009-03-25 15:31:19
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wangtengxu

木虫 (正式写手)
1.你的第一步PCR显然不行，条带那么弱，是不能做二次PCR的模板的
2.首先重新优化PCR体系，要扩出清晰的带
1）增加模板量（是CDNA吗？）
2）增加循环数
3）试试降低退火温度

关注中
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想和有趣的人一起做有趣的事。
16楼2009-03-25 19:01:48
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jqq1985

银虫 (正式写手)
本人出现同样问题，盼解答
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17楼2009-03-25 20:09:35
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xia710516

金虫 (正式写手)
检查一下反应体系吧，16srna是多拷贝的，根本不用二次PCR。
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18楼2009-03-25 22:45:27
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357277005

金虫 (正式写手)
第一个图你是不是应该重新仔细做一遍，是不是忘加了什么，或是污染了。第二个图有点意思了，应该再优化一下条件比如加点离子如镁离子之类的。可以借本书看看
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豆豆，可爱的豆豆！
19楼2009-03-25 22:46:22
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xuyh3000

铁虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~ 3-26 15:18
二次PCR模板可能就是没有稀释，污染多，特异性很差，建议摸索你本身的退火温度，或做个降落PCR，增加亮度选做二次PCR并不是什么好的选择。
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20楼2009-03-26 10:31:02
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