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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 再追加20个金币，求高人帮我解析一下电泳图
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hharl

铜虫 (初入文坛)

[交流] 再追加20个金币，求高人帮我解析一下电泳图

图片中marker右面是二次PCR产物跑的琼脂糖，请问怎么能跑成这样 啊。什么原因啊。
marker右面是细菌16S rDNA的V3区片段，
但是跑成涂抹的是怎么回事？

图片1是一次PCR的产物跑的琼脂糖，可以看出条带。图片2中marker右面是二次PCR产物跑的琼脂糖，请问怎么能跑成这样啊,什么原因?环境体系什么的都相同，怎么二次P的时候就涂抹了呢？高人啊，求救啊~~~~

[ Last edited by hharl on 2009-3-24 at 16:14 ]
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1楼 2009-03-23 21:23:31
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):3Q~ 3-26 15:17
个人认为模板降解的可能性比较大，因为二次pcr是用pcr产物做模板的，pcr产物本身就不稳定，所以再次pcr的时候特别容易出现弥散带，可以用一种高保真的taq酶试试看，另外，如果是模板浓度有问题的话，你可以做一个梯度稀释，一般浓度高容易出现弥散；顺便说一下，第一副电泳图的产物浓度太低了，条带很不清晰（原因很多，引物错配，模板不纯都有可能），用这样的模板很难进行二次pcr的，所以，还是先优化一下第一次pcr，再继续往下做。
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会当凌绝顶，一览众山小
13楼2009-03-25 05:16:25
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
hharl(金币+1,VIP+0):O(∩_∩)O谢谢 3-24 09:46
就是没有扩增出来，PCR的条件可以简要介绍一下吗？退火温度不合适、引物特异性不好、镁离子浓度不合适等等都有可能出现这种情况。
赞一下(3人) 回复此楼
金币是赌出来的
2楼2009-03-24 09:20:36
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xiangzi073

木虫 (著名写手)
★
hharl(金币+1,VIP+0):O(∩_∩)O谢谢 3-24 09:46
可能是忘记加什么成分了？
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做人要知足做事要知不足做学问要不知足
3楼2009-03-24 09:29:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
hharl(金币+5,VIP+0):平时都能P出来的，都是按文献走的，不知道为什么这次不行，愁死我了！ 3-24 09:45
hharl(金币+1,VIP+0):shi yinwu yongcole 4-8 10:57
典型的二次扩增时，模板没有稀释，或者说稀释倍数不够
第二种情况是酶加太多了
还有就是退火温度太低
我建议你用热启动酶试试
赞一下(5人) 回复此楼
4楼2009-03-24 09:31:29
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