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hharl

铜虫 (初入文坛)

[交流] 再追加20个金币,求高人帮我解析一下电泳图

图片中marker右面是二次PCR产物跑的琼脂糖,请问怎么能跑成这样 啊。什么原因啊。
marker右面是细菌16S rDNA的V3区片段,
但是跑成涂抹的是怎么回事?

图片1是一次PCR的产物跑的琼脂糖,可以看出条带。图片2中marker右面是二次PCR产物跑的琼脂糖,请问怎么能跑成这样啊,什么原因?环境体系什么的都相同,怎么二次P的时候就涂抹了呢?高人啊,求救啊~~~~

[ Last edited by hharl on 2009-3-24 at 16:14 ]
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户


hharl(金币+1,VIP+0):O(∩_∩)O谢谢 3-24 09:46
就是没有扩增出来,PCR的条件可以简要介绍一下吗?退火温度不合适、引物特异性不好、镁离子浓度不合适等等都有可能出现这种情况。
金币是赌出来的
2楼2009-03-24 09:20:36
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xiangzi073

木虫 (著名写手)


hharl(金币+1,VIP+0):O(∩_∩)O谢谢 3-24 09:46
可能是忘记加什么成分了?
做人要知足做事要知不足做学问要不知足
3楼2009-03-24 09:29:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★ ★
hharl(金币+5,VIP+0):平时都能P出来的,都是按文献走的,不知道为什么这次不行,愁死我了! 3-24 09:45
hharl(金币+1,VIP+0):shi yinwu yongcole 4-8 10:57
典型的二次扩增时,模板没有稀释,或者说稀释倍数不够
第二种情况是酶加太多了
还有就是退火温度太低
我建议你用热启动酶试试
4楼2009-03-24 09:31:29
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Charlie1331

金虫 (正式写手)


hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:55
是不是跑胶时的缓冲液里杂质太多了呢?建议换缓冲液。
5楼2009-03-24 12:18:45
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redfoliage

铜虫 (初入文坛)

★ ★
hharl(金币+2,VIP+0):我又重新做了一回,还那样。我晕死了 3-24 15:57
应该不是电泳的问题,Maker跑的很好啊,可能还是PCR的问题,如果以前相同条件能扩增出来的,会不会PCR体系有问题了,dNTP反复冻融?引物时间太久了?酶有问题了?建议换新的体系再做一次
细节决定成败
6楼2009-03-24 12:45:51
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虫子739

铁虫 (小有名气)


hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:58
你首先检查一下是否是模板降解。然后考虑是否模板不纯,可能含有抑制PCR酶的杂质。重新考虑提取方法
7楼2009-03-24 12:51:16
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darming

铁虫 (初入文坛)


hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:58
提高一下引物浓度
8楼2009-03-24 14:56:09
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)


hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:59
出现smear,重新做PCR
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
9楼2009-03-24 15:19:58
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zcy1121

木虫 (正式写手)


hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 21:44
有可能是模板或者引物降解了,
或者PCR特异性不好
10楼2009-03-24 16:21:49
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