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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 再追加20个金币，求高人帮我解析一下电泳图
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hharl

铜虫 (初入文坛)

[交流] 再追加20个金币，求高人帮我解析一下电泳图

图片中marker右面是二次PCR产物跑的琼脂糖，请问怎么能跑成这样 啊。什么原因啊。
marker右面是细菌16S rDNA的V3区片段，
但是跑成涂抹的是怎么回事？

图片1是一次PCR的产物跑的琼脂糖，可以看出条带。图片2中marker右面是二次PCR产物跑的琼脂糖，请问怎么能跑成这样啊,什么原因?环境体系什么的都相同，怎么二次P的时候就涂抹了呢？高人啊，求救啊~~~~

[ Last edited by hharl on 2009-3-24 at 16:14 ]
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1楼 2009-03-23 21:23:31
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
hharl(金币+1,VIP+0):O(∩_∩)O谢谢 3-24 09:46
就是没有扩增出来，PCR的条件可以简要介绍一下吗？退火温度不合适、引物特异性不好、镁离子浓度不合适等等都有可能出现这种情况。
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金币是赌出来的
2楼2009-03-24 09:20:36
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xiangzi073

木虫 (著名写手)
★
hharl(金币+1,VIP+0):O(∩_∩)O谢谢 3-24 09:46
可能是忘记加什么成分了？
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做人要知足做事要知不足做学问要不知足
3楼2009-03-24 09:29:39
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
hharl(金币+5,VIP+0):平时都能P出来的，都是按文献走的，不知道为什么这次不行，愁死我了！ 3-24 09:45
hharl(金币+1,VIP+0):shi yinwu yongcole 4-8 10:57
典型的二次扩增时，模板没有稀释，或者说稀释倍数不够
第二种情况是酶加太多了
还有就是退火温度太低
我建议你用热启动酶试试
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4楼2009-03-24 09:31:29
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:55
是不是跑胶时的缓冲液里杂质太多了呢？建议换缓冲液。
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5楼2009-03-24 12:18:45
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redfoliage

铜虫 (初入文坛)
★ ★
hharl(金币+2,VIP+0):我又重新做了一回，还那样。我晕死了 3-24 15:57
应该不是电泳的问题，Maker跑的很好啊，可能还是PCR的问题，如果以前相同条件能扩增出来的，会不会PCR体系有问题了，dNTP反复冻融？引物时间太久了？酶有问题了？建议换新的体系再做一次
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细节决定成败
6楼2009-03-24 12:45:51
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虫子739

铁虫 (小有名气)
★
hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:58
你首先检查一下是否是模板降解。然后考虑是否模板不纯，可能含有抑制PCR酶的杂质。重新考虑提取方法
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7楼2009-03-24 12:51:16
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darming

铁虫 (初入文坛)
★
hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:58
提高一下引物浓度
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8楼2009-03-24 14:56:09
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 15:59
出现smear，重新做PCR
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
9楼2009-03-24 15:19:58
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zcy1121

木虫 (正式写手)
★
hharl(金币+1,VIP+0):谢谢 3-24 21:44
有可能是模板或者引物降解了，
或者PCR特异性不好
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10楼2009-03-24 16:21:49
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