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孤单芭蕾527

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[求助] T载体克隆已有2人参与

我的目的基因有2500左右，连接T载体，菌检的时候为什么T载体配套的引物M13F和M13R跑不出条带来，但是用我的目的基因的引物就跑出来了？

@youlinglyw @biostar2009 发自小木虫IOS客户端

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1楼 2018-05-16 17:05:30

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豆豆君123

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2018-05-16 17:48:08

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maoniuniu

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

建议菌PCR需要注意一下PCR的条件，比如你的变性温度和时间稍长一些，保证菌要完全裂解，菌体不要加的太多，都容易出假阴性，如果你是两组引物同时做的，通用引物没出来，可以提质粒后再PCR，一般会改善PCR的结果

不知道你目的如何？筛选阳性克隆？多挑些菌斑进行PCR，一般都是哪个P出来用哪个

祝好

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3楼2018-05-18 17:05:15

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mewenji

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1、酶切鉴定
2、直接测序

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4楼2018-05-19 22:28:24

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孤单芭蕾527

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引用回帖:

3楼: Originally posted by maoniuniu at 2018-05-18 17:05:15
建议菌PCR需要注意一下PCR的条件，比如你的变性温度和时间稍长一些，保证菌要完全裂解，菌体不要加的太多，都容易出假阴性，如果你是两组引物同时做的，通用引物没出来，可以提质粒后再PCR，一般会改善PCR的结果

...

好的，谢谢

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5楼2018-05-21 13:26:16

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