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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)

[求助] T载体克隆已有2人参与

我的目的基因有2500左右,连接T载体,菌检的时候为什么T载体配套的引物M13F和M13R跑不出条带来,但是用我的目的基因的引物就跑出来了?

@youlinglyw @biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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豆豆君123

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2018-05-16 17:48:08
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议菌PCR需要注意一下PCR的条件,比如你的变性温度和时间稍长一些,保证菌要完全裂解,菌体不要加的太多,都容易出假阴性,如果你是两组引物同时做的,通用引物没出来,可以提质粒后再PCR,一般会改善PCR的结果

不知道你目的如何?筛选阳性克隆?多挑些菌斑进行PCR,一般都是哪个P出来用哪个

祝好
3楼2018-05-18 17:05:15
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mewenji

木虫 (小有名气)

1、酶切鉴定
2、直接测序
4楼2018-05-19 22:28:24
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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by maoniuniu at 2018-05-18 17:05:15
建议菌PCR需要注意一下PCR的条件,比如你的变性温度和时间稍长一些,保证菌要完全裂解,菌体不要加的太多,都容易出假阴性,如果你是两组引物同时做的,通用引物没出来,可以提质粒后再PCR,一般会改善PCR的结果

...

好的,谢谢

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5楼2018-05-21 13:26:16
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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mewenji at 2018-05-19 22:28:24
1、酶切鉴定
2、直接测序

好的,谢谢

发自小木虫IOS客户端
6楼2018-05-21 13:26:26
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yuting8586

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有可能是假阳性,做转化的时候目的基因片段加多了
7楼2018-11-02 15:38:09
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css910320

银虫 (正式写手)

用infusion链接吧,,一次成功

发自小木虫Android客户端
8楼2018-12-16 17:40:27
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