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2429650199

新虫 (正式写手)

[交流] 关于用EDC/NHS活化抗体上羧基的最佳条件的问题 已有4人参与

各位虫友早上好,实验一直遇到瓶颈,感觉好烦躁,做电化学免疫传感器时为了将抗体结合在氨基化的无机材料上,用EDC/NHS活化的方法活化羧基,但是测DPV总感觉结合效果不好,不知道是不是活化条件没控制好,还是孵化过程有问题,希望做过相关工作并成效卓著的虫友能给个建议

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2429650199

新虫 (正式写手)

2楼2018-05-15 11:55:32
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2429650199

新虫 (正式写手)

3楼2018-05-15 11:55:41
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我是小魔菇

禁虫 (初入文坛)


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4楼2018-05-18 19:40:21
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dylee

金虫 (著名写手)

Immunoassay-Man


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Follow this paper to try periodate method to make orientated conjugation. Good luck.
Sara Puertas, Pilar Batalla, María Moros, Ester Polo, Pablo del Pino, José M. Guisán, Valeria Grazú, Jesús M. de la Fuente. Taking Advantage of Unspecific Interactions to Produce Highly Active Magnetic Nanoparticle−Antibody Conjugates. ACS Nano. 2011, 5(6): 4521-4528.

Just try the old classcial style (change its magnetic beads to your electrode surface)
Immobilization via the Carbohydrates Moieties of the Antibody. One milliliter of an antibody solution 1 mg/mL in 10 mM
sodium phosphate pH 7.0 was incubated with 100 μL of 0.1 M
NaIO4 (prepared in water) during 2 h at 4C and preserved from
light. Then, the oxidized antibody was purified by Sephadex
G-25 gel filtration column with 10 mM sodium phosphate pH
8.0. Aliquots of 10 mg of aminated nanoparticles were incubated during 2 h at 37 C with 1 mL of a 100 μg/mL solution of
oxidized antibody in 10 mM sodium phosphate pH 8.0. Then,
NaCNBH3 was added in order to have a final concentration of
0.25 M. After 30 min at 37 C, the functionalized nanoparticles
were washedthree times with10 mM sodium phosphate pH 8.0.
Finally, the remaining amine groups of the nanoparticles were
blocked by incubation with 1 mL BSA 1% in 10 mM MES pH 6.1
for 16 h at 25 C and were stored at 4 C until used.
呃我没说我是好人吧
5楼2018-05-20 05:05:28
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dylee

金虫 (著名写手)

Immunoassay-Man


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by dylee at 2018-05-19 09:05:28
Follow this paper to try periodate method to make orientated conjugation. Good luck.
Sara Puertas, Pilar Batalla, María Moros, Ester Polo, Pablo del Pino, José M. Guisán, Valeria Grazú, Jesús M ...

" Then, the oxidized antibody was purified by Sephadex
G-25 gel filtration column with 10 mM sodium phosphate pH
8.0. "  This step can be replaced using Zeba™ Spin Desalting Columns "https://www.thermofisher.com/ord ... ct/89882". Much simple  and fast without diluting your antibody.
呃我没说我是好人吧
6楼2018-05-20 05:16:30
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南京沙子

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不用DPV,用其他扫描方法试试
7楼2018-05-22 10:23:46
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yyy_c

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2429650199 at 2018-05-15 11:55:32
有人嘛,来救救我吧

楼主,我和你的情况很相似,不知你现在处理的怎么样了
8楼2018-06-29 16:05:39
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