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小?求大神

新虫 (初入文坛)

[求助] 跪求大神设计引物,我是做原核表达的,之前设计的都是引物二聚体,没有扩出来

ATGCAGGATTCTGGAATCGAGTTTGATATAGCTTCACTTGCCGACGCAGATCAAGTTTTAAACGATGACAAAAATTTTTACCAGCTGAAAAGTAAAACGATCGTTCAAAGCCAAAGCAACAACATGACAAAACTAGACGTCTCAAAGGGAAACCTGCGAGCGAACCTCCGCCTCCAGCTGATGCGTTTGCAGACGGAACAGGAGGAGAAAAAGAACGAGCAGACACCATCCTACTCCCAGTCCTACCGGCCAGCTCATACCGCTCCTCAGTCGATCCAGATACCGGCGGGCTCCGTTAGCTCCAGTACAGAGGTCCCTACACGAGTTCTTACAGTGAAGACTCAGCTAGAAAACCCAACACAGTTCCATGTGACTGAGAACCAGAAGCGACAGATTCACCTGTTCCTGCACAACTCTGGTAAGGTGACCACCGCCCAGTCTATGCCTGCCCTCACCACACAGATCCCTGGGGCCAATATGGTGCCCACTACGGTCAGTGGCAGCGCCCCCGTGGACCCGGACAGCCCGCTCTCCATGGGACTCAGCAGTGCCACTAACAGTGTCTCAGATTTCAATGAGGTGGATAACCTTTTGAATGACCTCATCAGCTTGGAGTCAGTGGATCCTAATGTAGACCAGGATCTTAATCTGTTGGAACCCTCCCTCAACCACATGTCCACAACACTTCCCCATTCAAACAACATCCTTGGTCTGTACGACACAAACGATGATGCATCGAATGGAGCCAGCTCCTGCCCCGCCAAGTTTCAGGCGGGGGAACTGAGGCTGCCAGAGTTCATGTCTGAGGAGGAAAAGAGAATGTGGGCAAAGGACCGACAGAAGAAAGACAACCATAACATGATTGAGAGAAGAAGAAGATTCAACATAAACGACAGAATCAAAGAACTTGGCACTCTCCTCCCAAAGAGCACCGACCCTGACATGAGACAGAACAAGGGAACGATCCTGAAGGCCTCAGTGGAGTACATCCGCCGGCTGAAGAAGGACCAGGACCGGATGAAGCTGATGGAGACCCGCCAGAGACAGCTGGAGATGAACAACAGGAAGCTGCTCCTCAGAATGCAGCAAATGGAGTTGGTCATGAAATCTCAAGGAATGGGAACTGGTCTTGACAATGAAATAGAACAACTGACACTCACCCAGCAACCAGCCCCCTTTCAGGCCGCCAAATTCCAGCCTGATCTAACTCAAACCAATGTTTTCGTGAACCATGCTAACATCATGGATGAGTTCATGGATGACAGTTCTCCCGTGAACGCGGACCCTATGCTGTCGTCTGAGCCCGTGAGTCCCAGTAACCTGGACGATTCATCAGACATGTTATGA
这是ORF,包括启动和终止密码子,没有信号肽,求大神帮助,比较急????

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小?求大神

新虫 (初入文坛)

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7楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2018-05-08 21:26:02
可能不是引物的问题,用的是cDNA模板还是质粒模板?普通的酶还是专门扩增高GC含量的酶?从你这段序列来看,里面的C含量貌似很高,如果是普通的taq酶,试试换高GCtaq酶。

cDNA模板。是r Taq酶

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8楼2018-05-08 23:49:37
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小?求大神

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 小?求大神 at 2018-05-08 13:54:15
ATGCAGGATTCTGGAATCGAGTTTGATATAGCTTCACTTGCCGACGCAGATCAAGTTTTAAACGATGACAAAAATTTTTACCAGCTGAAAAGTAAAACGATCGTTCAAAGCCAAAGCAACAACATGACAAAACTAGACGTCTCAAAGGGAAACCTGCGAGCGAACCTCCGCCTCCAGCTGATGCGTTTGCAGACGGAAC ...

我做的是原核表达

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2楼2018-05-08 13:56:30
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

你原来设计的什么引物?

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3楼2018-05-08 14:07:56
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小?求大神

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-05-08 14:07:56
你原来设计的什么引物?

也是做原核表达的引物,就是扩出ORF.加酶切位点的pcr引物,但是跑出来只有引物二聚体

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4楼2018-05-08 14:30:39
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