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nicegreat

新虫 (小有名气)

[求助] 基因文库 已有1人参与

各位前辈们,我在构建基因文库。由于脉冲场电泳坏了,可以用普通的电泳仪来进行低熔点凝胶电泳吗?(分离效果好吗?)多谢啦,拜托!

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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-08 07:56:51
描述清楚一点,具体是什么文库、要上什么平台?

用脉冲电泳都用上了,应该是三代基因组文库?做de novo的吗?多大文库?
2019更好更棒!
2楼2018-05-07 21:02:02
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nicegreat

新虫 (小有名气)

构建链霉菌的基因组文库,用来异源表达,目标基因簇14kb大小。

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3楼2018-05-07 23:35:40
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nicegreat

新虫 (小有名气)

4楼2018-05-07 23:36:41
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by nicegreat at 2018-05-07 23:36:41
多谢了,第一次建库

14kb的文库跑琼脂糖胶有点悬,分不开,琼脂糖胶10k以上的片段都区分不太准确(0.7-0.8%的胶),还是脉冲吧
2019更好更棒!
5楼2018-05-08 21:29:53
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nicegreat

新虫 (小有名气)

6楼2018-05-09 00:07:37
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nicegreat

新虫 (小有名气)

我在网上看有倒转电场凝胶电泳可以分离大分子DNA,请问您了解吗

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7楼2018-05-09 00:08:42
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by nicegreat at 2018-05-09 00:08:42
我在网上看有倒转电场凝胶电泳可以分离大分子DNA,请问您了解吗

倒转电场,应该就是脉冲场电泳的意思。跑电泳时,会正负极交换,像sage science的pippin pulse(一个方向,还有一种是六边形,对角交换正负极),原理是电场方向改变,大分子的DNA滞留胶孔中,直到沿新的电场重新定向后,才能继续向前移动,大分子DNA重新定位需要的时间长。当DNA分子变换方向的时间小于脉冲周期时,DNA就可以按其分子量大小分开。
2019更好更棒!
8楼2018-05-10 09:05:34
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nicegreat

新虫 (小有名气)

哦哦,明白了,多谢大神啦

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9楼2018-05-11 19:52:05
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nicegreat

新虫 (小有名气)

还有个问题想向您请教,我建库处理载体时,用单酶切后进行去磷酸化处理,然后T4连接验证去磷酸化效果,结果发现未去磷酸化与去磷酸化长菌数差不多,并且都不多。请问是什么问题啊?做了两次都是这个情况

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10楼2018-05-11 19:54:15
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