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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 基因文库
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nicegreat

新虫 (小有名气)

[求助] 基因文库 已有1人参与

各位前辈们，我在构建基因文库。由于脉冲场电泳坏了，可以用普通的电泳仪来进行低熔点凝胶电泳吗？（分离效果好吗？）多谢啦，拜托！

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1楼 2018-05-07 18:23:26
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-08 07:56:51
描述清楚一点，具体是什么文库、要上什么平台？

用脉冲电泳都用上了，应该是三代基因组文库？做de novo的吗？多大文库？
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2019更好更棒!
2楼2018-05-07 21:02:02
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nicegreat

新虫 (小有名气)
构建链霉菌的基因组文库，用来异源表达，目标基因簇14kb大小。

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3楼2018-05-07 23:35:40
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nicegreat

新虫 (小有名气)
多谢了，第一次建库

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4楼2018-05-07 23:36:41
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by nicegreat at 2018-05-07 23:36:41
多谢了，第一次建库

14kb的文库跑琼脂糖胶有点悬，分不开，琼脂糖胶10k以上的片段都区分不太准确（0.7-0.8%的胶），还是脉冲吧
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2019更好更棒!
5楼2018-05-08 21:29:53
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nicegreat

新虫 (小有名气)
哦哦多谢啦

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6楼2018-05-09 00:07:37
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nicegreat

新虫 (小有名气)
我在网上看有倒转电场凝胶电泳可以分离大分子DNA，请问您了解吗

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7楼2018-05-09 00:08:42
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by nicegreat at 2018-05-09 00:08:42
我在网上看有倒转电场凝胶电泳可以分离大分子DNA，请问您了解吗

倒转电场，应该就是脉冲场电泳的意思。跑电泳时，会正负极交换，像sage science的pippin pulse（一个方向，还有一种是六边形，对角交换正负极），原理是电场方向改变，大分子的DNA滞留胶孔中，直到沿新的电场重新定向后，才能继续向前移动，大分子DNA重新定位需要的时间长。当DNA分子变换方向的时间小于脉冲周期时，DNA就可以按其分子量大小分开。
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2019更好更棒!
8楼2018-05-10 09:05:34
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nicegreat

新虫 (小有名气)
哦哦，明白了，多谢大神啦

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9楼2018-05-11 19:52:05
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nicegreat

新虫 (小有名气)
还有个问题想向您请教，我建库处理载体时，用单酶切后进行去磷酸化处理，然后T4连接验证去磷酸化效果，结果发现未去磷酸化与去磷酸化长菌数差不多，并且都不多。请问是什么问题啊？做了两次都是这个情况

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10楼2018-05-11 19:54:15
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