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bbyu007木虫 (正式写手)
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[交流]
用Sal1和Mlu1构建载体求助！
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打算用高保真酶KOD先PCR扩增目的片段（作为insret），上游引物加Sal1酶切位点，下游引物加Mlu1酶切位点，然后连pEASY-T（Blunt）载体并将此目的片段切出来备用。 请问：（1）可以用这2个酶做双酶切反应吗，效果好吗？（我查到这2个酶都用 H buffer，酶切反应温度均为：37°C） （2）载体的MCS上也有这2个酶切位点，但是距离只有12bp，可以做双酶切反应吗？如果做分步酶切的话，Sal1和Mlu1先用哪一个？（载体MCS上，这2个酶切位点的先后顺序为：Sal1 、Mlu1） 敬请高手虫虫进来解答！在线等！感激涕零啦~~  |
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