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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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huxuesong143

金虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物问题

我要鉴定一只菌,初步定为放线菌,提出来的基因组跑胶后显示大于12000bp,而用16S通用引物克隆出来的,产物不一,用TAKARA ex Taq酶只产物1500bp一条,而用上海生工的pfu taq 酶产物有很多条,1000bp,800bp,500以下还有拖尾现象,请各位帮忙解答一下啊,谢了先啊。

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-4 at 20:53 ]
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wangtengxu

木虫 (正式写手)

1)pfu也可能有非特异性扩增
2)建议用pfu重新扩增,做个梯度PCR,提高退火温度,降低dNTP加入量
3)最好把你的gDNA质量提高下
想和有趣的人一起做有趣的事。
10楼2009-04-01 23:07:33
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huxuesong143

金虫 (初入文坛)

附电泳条带图

各位,帮忙看看啊
2楼2009-03-22 13:05:06
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欣晴5832

金虫 (小有名气)

是不是Taq酶被污染了呀,你再查文献看看一般放线菌的16S有多大
3楼2009-03-22 16:28:06
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huxuesong143

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 欣晴5832 at 2009-3-22 16:28:
是不是Taq酶被污染了呀,你再查文献看看一般放线菌的16S有多大

我买的是不同公司的酶,新的,应该不存在污染的问题啊
4楼2009-03-25 22:05:44
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