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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » CHI,PAL酶活性
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
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CHI,PAL酶活性
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PAL、CHI 酶活性的测定 取 0.5  g 果皮加入 5  ml 提取液  [0.05  mol·L-1 Na2HPO4/KH2PO4(p H  7.0)，0.05  mol·L-1抗坏血酸，0.018  mol·L-1巯基乙醇]，冰浴匀浆，4  oC 下 15  000  g离心 20 min，取上清液为粗酶液。
PAL： 取0.5m L酶粗提液，加入2.5m L的反应体系（包括硼酸缓冲液，p H 8.8；0.01M 苯丙氨酸）34℃水浴30min 后，加入三氟乙酸终止反应。12,000 rpm 离心5min，除去变性的蛋白质。反应生成的肉桂酸含量用290nm的吸光度值来表示。
CHI酶活性测定：取0.75 m L酶粗提液，加入2 m L混合反应液［50m mol·L-1的Tris-HCL（p H 7.4）、7.5 mg·L-1 BSA，50m mol·L-1的Na HSO3］，然后加入50μL 1 mg·m L-1的查尔酮溶液。34℃水浴30min 后，在381nm处测定吸光值，用吸光值的变化表示CHI酶的活性，每小时光密度变化0.001所需的酶量为一个单位U。
大家查尔酮溶液用什么配置呢？
以沸水浴灭活酶活性为对照，按这个方案做实验，预实验觉得没问题，但正式做的结果是对照的吸光度比实验组的吸光度还高，而且吸光度都异常，在0.6-0.8左右，求解，实验卡在这了，求大神！急急急，在线等

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1楼 2018-04-23 08:27:32
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
大家，不要领了金币不说话啊

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7楼2018-04-23 08:43:02
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静怡止远

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
CHI和PAL之前我用的试剂盒测定，说明书里有测定方法，需要的话可以给你参考
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11楼2018-04-25 09:45:54
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柠檬树123456

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 静怡止远 at 2018-04-25 09:45:54
CHI和PAL之前我用的试剂盒测定，说明书里有测定方法，需要的话可以给你参考

试剂盒也用过，太贵了，不用了。

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12楼2018-04-25 11:09:41
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静怡止远

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
沸水浴处理对照组容易出现OD值异常，之前测PG酶时也有这样的情况，我的处理方法是将提取上清稀释10倍后测定，结果就好了，你也可以尝试将沸水浴后的体系离心一下，排除产生杂质物质的影响。
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13楼2018-04-25 13:05:34
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死神的右手

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我用分光计测过几次各种浓度啊乱七八糟 个人一直感觉这个东西不稳定，可能还是操作上有瑕疵吧，肯定是反应体系里有了不该有的东西
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14楼2018-08-01 09:32:25
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pandongzi2楼
2018-04-23 08:30   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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ygsu3楼
2018-04-23 08:37   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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plantabiotic4楼
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Cristina09265楼
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柠檬树123456(金币+2): 谢谢参与
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若你⑤6楼
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艾哈穆德8楼
2018-04-23 08:44   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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wanwlzwj9楼
2018-04-23 08:44   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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一枚考研?10楼
2018-04-23 08:45   回复  
柠檬树123456(金币+1): 谢谢参与
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