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quzhongzhi新虫 (初入文坛)
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[求助]
胶回收和PCR阴性对照污染问题咨询
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1.在做一段长度2000bp的基因扩增的时候，发现阴性对照也能扩出条带，很亮而且明显与目标条带区分，是非目标条带的污染。后来重新做dd水灭菌，重新配引物，更换2X taq mix，枪头和PCR管也都是用新灭菌的，在做一遍，还是污染。但是做另一段2000bp基因扩增的时候阴性对照就没什么问题。 2.我对一段目的基因进行割胶回收，大小1900，回收前跑出来的电泳是含不少杂带的，目标条带大小与非特异条带大小至少有56百bp的区别，同时阴性对照没显示有问题。用回收产物在做PCR，在没有稀释回收产物的情况下，发现再次PCR仍然会有杂带，而且不是与目标片段接近的那种，是分的比较开的杂带。所以想问一下，这样的情况下我能否将回收产物送去测序。我的延生时间是2min，退火温度50度。 |
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