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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助－sfiI 限制性内切酶的特性
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heyi_zju

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助－sfiI 限制性内切酶的特性

我要构建一些载体，载体上特有的酶切位点是sfiI ，在使用的过程中发现如果是过夜酶切的话，好像片断会被切坏，导致电泳后目的片段的大小不对，如果时间短的话，酶切的效果不是很好，电泳检测到的目的片段量很少。

请教用过这个酶的朋友，使用sfiI最佳的酶切时间是多少？  在使用的过程中还有其他什么地方需要注意的？
谢谢！
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1楼 2009-03-19 18:35:13
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heyi_zju

铜虫 (小有名气)
还有用过的朋友请给我点意见呢
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4楼2009-03-19 22:10:06
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Ella14

银虫 (小有名气)
按说明书上操作，一般2个半小时。
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2楼2009-03-19 19:22:58
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heyi_zju

铜虫 (小有名气)
谢谢，那个说明上的写的也不是很清楚，我今天尝试过两个小时，但是好像效果还不是很理想呢！
引用回帖:
Originally posted by Ella14 at 2009-3-19 19:22:
按说明书上操作，一般2个半小时。

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3楼2009-03-19 19:26:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
识别位点



在不同反应缓冲液中的活性
NEBuffer  1: 0%

NEBuffer  2: 100%

NEBuffer  3: 10%

NEBuffer  4: 100%




酶的特性
浓度：20,000 units/ml(通过Adenovirus-2 DNA鉴定)。

反应缓冲液：(随酶提供) NEBuffer 2 + BSA。

反应温度：50°C温育。

热失活：无。



概述
来源：重组E. coli 菌株，包含有从Streptomyces fimbriatus (ATCC 15051) 克隆的SfiI基因。

连接和再切：经过SfiI 10倍过量消化, 超过95%的DNA片段能够被连接和再切。

贮存条件：贮存于-20°C (含50%甘油)。

稀释兼容性：稀释液C。



注意事项
1. 对dcm和哺乳动物CpG甲基化敏感。

2. SfiI的切割需要两个拷贝数的识别位点。

3. 37°C温育只有10%的活性。




买NEB的，根据质粒浓度调整酶切时间，一般一个小时足矣
买takara的就只好一边哭去了……
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5楼2009-03-19 23:20:40
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