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求助－sfiI 限制性内切酶的特性
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我要构建一些载体，载体上特有的酶切位点是sfiI ，在使用的过程中发现如果是过夜酶切的话，好像片断会被切坏，导致电泳后目的片段的大小不对，如果时间短的话，酶切的效果不是很好，电泳检测到的目的片段量很少。 请教用过这个酶的朋友，使用sfiI最佳的酶切时间是多少？ 在使用的过程中还有其他什么地方需要注意的？ 谢谢！ |
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Ella14
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2楼2009-03-19 19:22:58
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三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
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- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
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识别位点 在不同反应缓冲液中的活性 NEBuffer 1: 0% NEBuffer 2: 100% NEBuffer 3: 10% NEBuffer 4: 100% 酶的特性 浓度：20,000 units/ml(通过Adenovirus-2 DNA鉴定)。 反应缓冲液：(随酶提供) NEBuffer 2 + BSA。 反应温度：50°C温育。 热失活：无。 概述 来源：重组E. coli 菌株，包含有从Streptomyces fimbriatus (ATCC 15051) 克隆的SfiI基因。 连接和再切：经过SfiI 10倍过量消化, 超过95%的DNA片段能够被连接和再切。 贮存条件：贮存于-20°C (含50%甘油)。 稀释兼容性：稀释液C。 注意事项 1. 对dcm和哺乳动物CpG甲基化敏感。 2. SfiI的切割需要两个拷贝数的识别位点。 3. 37°C温育只有10%的活性。 买NEB的，根据质粒浓度调整酶切时间，一般一个小时足矣 买takara的就只好一边哭去了…… |
5楼2009-03-19 23:20:40
6楼2009-03-22 21:43:15
