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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR技术问题
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 求助PCR技术问题

我的PCR体系都不变，温度也没改变，可是为什么出来的结果在电泳的时候都是不一样的呢？有时候出现一点目的条带，有时候不出，而且很多时候都是很多非特异性条带，！怎么回事呢？？？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-7 at 20:26 ]
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1楼 2009-03-19 17:10:07
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 3-21 18:42
你提高退火温度试一下，另外PCR体系中的各成分的量也需要优化调整
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2楼2009-03-20 09:34:20
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xipha

木虫 (正式写手)
可能没混匀
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3楼2009-03-20 10:45:06
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jiwu20

铜虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 3-21 18:42
我的PCR体系都不变，温度也没改变，可是为什么出来的结果在电泳的时候都是不一样的呢？模板的问题。
有时候出现一点目的条带，有时候不出，而且很多时候都是很多非特异性条带，！怎么回事呢？？？
还是模板的问题，
做实验一定要设阳性及阴性对照。iimportant
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4楼2009-03-20 11:27:38
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jiwu20 at 2009-3-20 11:27:
我的PCR体系都不变，温度也没改变，可是为什么出来的结果在电泳的时候都是不一样的呢？模板的问题。
有时候出现一点目的条带，有时候不出，而且很多时候都是很多非特异性条带，！怎么回事呢？？？
还是模板的问 ...

请问是模板哪里出了问题呢？是DNA降解了，还是被污染了呢？
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5楼2009-03-20 14:29:23
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jqq1985

银虫 (正式写手)
做温度的梯度看看
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6楼2009-03-20 20:14:15
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
PCR体系中各成分在加之前都轻轻混匀一下，那些产品都没什么问题吧？
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7楼2009-03-21 08:55:59
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
操作的问题
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
8楼2009-03-21 13:56:32
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linkfuture

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，欢迎常来~ 3-21 18:42
提高退火温度，模板可能有杂质
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9楼2009-03-21 17:30:12
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 欣晴5832 at 2009-3-21 08:55:
PCR体系中各成分在加之前都轻轻混匀一下，那些产品都没什么问题吧？

我也在想呢，可能是产品出了问题，还有自己的操作有问题！～
请问在PCR是先加水呢还是最后加呢？我之前都是先加水，而且最后加入模板，可能自己对这些操作顺序需要改进！～
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10楼2009-03-21 21:50:21
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