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Lynsey5166

铁虫 (小有名气)

[求助] 引物太长,扩不出来咋回事已有1人参与

万能的虫友,请教下这是咋回事。我在用red系统敲一个基因,用的pkd3载体,引物70bp,一直p不出来,要怎么改进呀。现在已经做过的尝试有,退火温度50~60,引物浓度0.1微摩,1微摩,10微摩,模板20ng,都试了,还是p不出来

@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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梦想是注定孤独的旅程
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sunshenmei

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Lynsey5166 at 2018-04-15 12:37:20
tm值是指参与扩增部分还是总的引物部分,参与扩增的部分只有25 bp,外源片段比较长
...

一般引物合成公司计算的Tm值是全部的碱基

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11楼2018-10-13 19:43:30
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wxm0212

新虫 (正式写手)

这么长的引物怎么退火温度这么低

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2楼2018-04-11 17:45:54
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aishida

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

3楼2018-04-11 17:58:54
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diaomou

新虫 (小有名气)

我也是,做点突变反向pcr,理论9.6k,一直产物电泳弥散

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4楼2018-04-11 18:49:29
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