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Chi?may

新虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白被凝血酶酶切效率低,好苦恼 已有2人参与

前几次切的还不错,最近总是切不好,也不知道什么原因,压力好大

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1020337251

新虫 (初入文坛)


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请问你用的哪个公司的酶啊,买了sigma的,效果不太好啊,一直有杂蛋白
2楼2018-09-06 12:52:31
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maoniuniu

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
thrombin买GE的比较好。如果你说前几次切的比较好,没有问题,最近切的有问题,那么可以考虑两方面,一方面是你的酶活性,是否因为保存条件等导致下降,可以加一个别人验证过的、能切开的蛋白作为对照,验证你的酶活。另一方面是你的蛋白纯化的是否有问题,是与前几次不同批次的蛋白吗?建议检查一下蛋白的质量,另外排除其中可能混有的蛋白酶抑制剂。如果从一开始就切的不好,但是酶活验证没有问题,则可以考虑加一些additive,具体可以参考各公司说明书,有很多大公司的thrombin说明书给出了相当多的酶切效果改善方法,可以适当选用尝试。祝好

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3楼2018-09-07 18:15:24
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maoniuniu

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最重要记着在实验出问题时一定要加对照(当然,最好每次实验都加),以排除你实验体系、操作这些问题

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4楼2018-09-07 18:19:36
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