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利用sf9及h5昆虫细胞表达蛋白 已有7人参与
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有谁做过Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达蛋白,能给我一些指导吗? 发自小木虫Android客户端 |
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10楼2024-10-08 21:06:25
2楼2018-05-18 17:10:52

3楼2018-05-25 09:56:16
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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您好,我想问您一些杆状病毒表达系统的问题吗? 1.如果我不测滴度的话,按照理论P3滴度是不是大于1X108了,那么我表达蛋白的时候能不能就按照1X108,MOI值5 来计算病毒加入的量,这样对表达量影响大么? 2.收菌的时间是48-72h,72h的时候已经有一些细胞破碎了,细胞活力在70-80%,我看手册上说,“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”是不是说收获的时候细胞活力只有20%,那岂不是很多细胞都破碎了,蛋白不就被降解了么?文献又有说细胞活力在90%的时候收,所以我就很困惑,什么时间收比较好 3.表达后,菌液高压破碎后特别稠,堵柱子,流过液中也有目的蛋白(带6个His-tag),感觉不挂柱,纯化的时候洗了好多梯度,蛋白还是很杂 |

4楼2018-07-19 15:43:37










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张林220