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利用sf9及h5昆虫细胞表达蛋白 已有7人参与
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有谁做过Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达蛋白，能给我一些指导吗？ 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2018-05-18 17:10:52
张林2203楼2018-05-25 09:56:16
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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您好，我想问您一些杆状病毒表达系统的问题吗？ 1.如果我不测滴度的话，按照理论P3滴度是不是大于1X108了，那么我表达蛋白的时候能不能就按照1X108，MOI值5 来计算病毒加入的量，这样对表达量影响大么？ 2.收菌的时间是48-72h,72h的时候已经有一些细胞破碎了，细胞活力在70-80%，我看手册上说，“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”是不是说收获的时候细胞活力只有20%，那岂不是很多细胞都破碎了，蛋白不就被降解了么？文献又有说细胞活力在90%的时候收，所以我就很困惑，什么时间收比较好 3.表达后，菌液高压破碎后特别稠，堵柱子，流过液中也有目的蛋白（带6个His-tag），感觉不挂柱，纯化的时候洗了好多梯度，蛋白还是很杂 |
4楼2018-07-19 15:43:37
5楼2018-08-15 08:18:14
6楼2018-08-15 09:05:05
张林220
木虫 (小有名气)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2019-09-16 20:17:07
xijie234
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8楼2020-06-10 11:03:31
9楼2024-10-08 20:57:43
10楼2024-10-08 21:06:25