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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 利用sf9及h5昆虫细胞表达蛋白
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瑜黎

铁虫 (小有名气)

[交流] 利用sf9及h5昆虫细胞表达蛋白 已有7人参与

有谁做过Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达蛋白，能给我一些指导吗？

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neversaynever
1楼 2018-04-10 20:55:44
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maoniuniu

新虫 (小有名气)
★
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有哪方面的问题呢？
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2楼2018-05-18 17:10:52
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半点心

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一直在做BAC-TO-BAC，有什么问题，我们一起交流
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

张林220
该签名无法显示,系统分析两种可能:一.你需要重新启动电脑;二.你的诚意不够,欲解决,马上邀请该联系人吃饭..
3楼2018-05-25 09:56:16
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寻一束光

铁虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 半点心 at 2018-05-25 09:56:16
我一直在做BAC-TO-BAC，有什么问题，我们一起交流

您好，我想问您一些杆状病毒表达系统的问题吗？
1.如果我不测滴度的话，按照理论P3滴度是不是大于1X108了，那么我表达蛋白的时候能不能就按照1X108，MOI值5 来计算病毒加入的量，这样对表达量影响大么？
2.收菌的时间是48-72h,72h的时候已经有一些细胞破碎了，细胞活力在70-80%，我看手册上说，“Harvest the virus when 70–80% of cells are dead”是不是说收获的时候细胞活力只有20%，那岂不是很多细胞都破碎了，蛋白不就被降解了么？文献又有说细胞活力在90%的时候收，所以我就很困惑，什么时间收比较好
3.表达后，菌液高压破碎后特别稠，堵柱子，流过液中也有目的蛋白（带6个His-tag），感觉不挂柱，纯化的时候洗了好多梯度，蛋白还是很杂
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静心尽力
4楼2018-07-19 15:43:37
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lsfyhx

新虫 (初入文坛)
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5楼2018-08-15 08:18:14
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寻一束光

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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静心尽力
6楼2018-08-15 09:05:05
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张林220

木虫 (小有名气)
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送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 半点心 at 2018-05-25 09:56:16
我一直在做BAC-TO-BAC，有什么问题，我们一起交流

你好，我想问一下，我的蛋白在昆虫里面表达量很低，杂带很多，有什么办法可以提高一下表达量吗？
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7楼2019-09-16 20:17:07
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xijie234

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 半点心 at 2018-05-25 09:56:16
我一直在做BAC-TO-BAC，有什么问题，我们一起交流

请问有多的thermo的sf9细胞吗？买的要一个月货期，现在急用，想求一点，也是用于bac-to-bac。坐标广州

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8楼2020-06-10 11:03:31
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河河冲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 寻一束光 at 2018-07-19 15:43:37
您好，我想问您一些杆状病毒表达系统的问题吗？
1.如果我不测滴度的话，按照理论P3滴度是不是大于1X108了，那么我表达蛋白的时候能不能就按照1X108，MOI值5 来计算病毒加入的量，这样对表达量影响大么？
2.收菌的 ...

你好,解决了吗
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9楼2024-10-08 20:57:43
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河河冲

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张林220 at 2019-09-16 20:17:07
你好，我想问一下，我的蛋白在昆虫里面表达量很低，杂带很多，有什么办法可以提高一下表达量吗？...

你好，解决了吗
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10楼2024-10-08 21:06:25
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