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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求大神！双酶切成功，但是连不到pET30a上
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shuichua95

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求大神！双酶切成功，但是连不到pET30a上 已有3人参与

求助各位大神！我们用Nde l 和Xho l双酶切，酶切成功，条带也亮。但是胶回收后DNA浓度不高，连接不到pET30a上，导入到TOP10后转化涂板，一个菌也不长 求大神指点

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1楼 2018-04-04 09:55:55
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-04-05 03:18:44
这个载体及酶切位点 我经常用的！

片段酶切完后，取少量电泳验证一下。

另，转化克隆一个不长，可能是感受态细胞没有活性了。（实际上空载体也会长出单克隆的）
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2楼2018-04-04 17:10:21
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶回收试剂盒效率不高，试试purimag的试剂盒

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3楼2018-05-09 00:39:33
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ZM93098

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不用胶回收，直接液回收，比如说索莱宝的1型核酸染料就不适合胶回收

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FUN
4楼2018-05-09 09:50:44
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