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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于酶提取过程中的储存问题
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tuhangul622

金虫 (小有名气)

[交流] 关于酶提取过程中的储存问题

各位大侠好！
我正在分离纯化一种谷氨酸脱羧酶，从植物组织中直接提取分离的，提取方案是：粗提——离子交换——分子筛——亲和层析。但问题就是，我在整个纯化过程中怎么保存这个酶才能长时间内不让它分解呢，冻干的话，书里说加甘油会影响下一步纯化，但不加甘油冻干会不会对蛋白质的稳定性有影响呢？诚恳求助，希望各位能给予宝贵的建议

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人的一生可以没有荣誉和鲜花，可不能没有自尊！
1楼 2018-03-30 08:00:27
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547star

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般分解就蛋白酶，可以加PMSF或Cocktail之类蛋白酶抑制剂；如果样品确实含有比较多蛋白酶，可以通过摸索条件，把纯化去除蛋白酶比较多的步骤放在较前面；另一个是变性，可以考虑缩短纯化流程时间，保持低温比如冰水浴；避免变性的另一个就是保护酶活性中心，一般通过添加底物有利于对活性中心进行保护；如果金属离子对样品有比较大的抑制，通过开始对样品的清洗，适当的添加EDTA之类可以保护；缓冲液的成分和浓度，pH值，也摸索到比较能保护活性的条件，都会对整个纯化有帮助。
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为什么
2楼2018-03-30 08:41:32
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