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tuhangul622

金虫 (小有名气)

[交流] 关于酶提取过程中的储存问题

各位大侠好!
我正在分离纯化一种谷氨酸脱羧酶,从植物组织中直接提取分离的,提取方案是:粗提——离子交换——分子筛——亲和层析。但问题就是,我在整个纯化过程中怎么保存这个酶才能长时间内不让它分解呢,冻干的话,书里说加甘油会影响下一步纯化,但不加甘油冻干会不会对蛋白质的稳定性有影响呢?诚恳求助,希望各位能给予宝贵的建议

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人的一生可以没有荣誉和鲜花,可不能没有自尊!
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木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般分解就蛋白酶,可以加PMSF或Cocktail之类蛋白酶抑制剂;如果样品确实含有比较多蛋白酶,可以通过摸索条件,把纯化去除蛋白酶比较多的步骤放在较前面;另一个是变性,可以考虑缩短纯化流程时间,保持低温比如冰水浴;避免变性的另一个就是保护酶活性中心,一般通过添加底物有利于对活性中心进行保护;如果金属离子对样品有比较大的抑制,通过开始对样品的清洗,适当的添加EDTA之类可以保护;缓冲液的成分和浓度,pH值,也摸索到比较能保护活性的条件,都会对整个纯化有帮助。
为什么
2楼2018-03-30 08:41:32
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