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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 200-400KD的蛋白做western
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吕葱葱同学

新虫 (初入文坛)

[交流] 200-400KD的蛋白做western 已有5人参与

最近用自己做的多抗检220KD和400KD的蛋白，总是检不出来带，内参没问题，求支招。

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好好学习
1楼 2018-03-29 19:35:43
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在水壹方

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
drwhoknowss: 金币+1, 鼓励交流 2018-03-29 23:49:27
蛋白分子量有点大

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2楼2018-03-29 23:41:49
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
既然内参没问题。抗体问题，或表达问题。另外，400kd真的很大
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2018-03-29 23:49:18
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fanray110

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
说实话，这个蛋白的大小吓到我了

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人常在什么都可以自由自在的时候，却被这种随心所欲的自由蒙蔽，虚掷时光而毫无知觉！
4楼2018-03-31 10:47:27
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掌控恶魔

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
400kd？你确定下你的蛋白胶能不能用于200-400的样品啊。或者你的体系是否适用啊

做不出结果的原因比较多，200-400kda，这个蛋白得多大啊。有可能蛋白不稳定，样品处理的时候导致发生了 降解？
也有可能目的蛋白的表达丰度不高，甚至没有表达蛋白，导致没有条带
抗体问题也有，抗体是用什么做抗原的？多肽还是蛋白？抗体的纯化方式，抗体的效价如何？
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5楼2018-04-02 15:15:19
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轻易不説

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
制胶的比例对么？400kd

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新人报到，多多关照
6楼2018-04-02 18:22:03
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吕葱葱同学

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 掌控恶魔 at 2018-04-02 15:15:19
400kd？你确定下你的蛋白胶能不能用于200-400的样品啊。或者你的体系是否适用啊

做不出结果的原因比较多，200-400kda，这个蛋白得多大啊。有可能蛋白不稳定，样品处理的时候导致发生了 降解？
也有可能目的蛋白 ...

我是敲除了一个很大的基因，它表达的蛋白有220KD，另一个基因表达400KD，敲除之后要回补，回补与敲除株都要在蛋白水平去验证蛋白在或者不在，因为PCR验证只是在基因水平上。抗体用是截断表达的蛋白做的，50KD，蛋白水平辅助验证，我不是专业做蛋白的，所以需要交流和讨伦。

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好好学习
7楼2018-04-02 22:15:31
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