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bbpiger

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC进样物质浓度相同,峰面积不同,而且差很多,峰越来越宽!已有5人参与

求助各位大神:

走HPLC出现以下问题:

1、进样的溶液中各物质(3个)浓度相同,但是峰面积随着出峰时间越来越低,尤其是第三个物质的峰面积更低。不仅如此,峰越来越宽!越来越矮!原因何在?

2、前几天做,和今天相同的条件相同的仪器,没有出现过倒峰,今天却出现了,是什么原因呢?


谢谢各位!
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新虫 (初入文坛)

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7楼: Originally posted by Fu_shulin at 2018-03-29 12:59:56
问题一,色谱踏板理论就是这么解释的,出峰越晚,峰越宽,高度越窄。

谢谢提醒!但是第三个物质峰又矮又胖,虽然不是做方法,可是真的放不出来给老师看。如塔板理论说的,想问问如何改善这样的情况?
9楼2018-03-29 20:32:17
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新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by 落叶的新生 at 2018-03-29 15:17:44
在同一波长下,每个物质的响应可能不同,所以有校正因子的存在。

噢噢噢!谢谢!我打算扫一下混标的紫外光谱图!看看我选的波长是否合适,因为之前是扫的单标,波长也是参考文献的,不知道有没有用
10楼2018-03-29 20:34:28
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6楼: Originally posted by zpsune at 2018-03-28 14:14:28
第一种情况可能是你选的方法不适合后面物质的检测,最好换一个更好的方法。
第二种情况你还是都检查一遍吧,流动相配制有无问题,有无脱气,洗针液还有没有,还有各个泵怎么样,再就是看柱子怎么了,应该有好多种情 ...

首先非常感谢您的解答!
但是我还是有疑问:第一种情况您说的方法不合适,是指我各个条件选的不合适吗,比如波长、柱温、pH、流动相比例、流速等吗,有没有可能是定量环出现问题了呢?

可是如果是定量环有问题,另外两种物质的峰看着正常啊,


我发现第二种情况的时候,确实发现了水相的吸滤头上有些许小气泡,然后我就purge 脱气处理了,可是仍然不行,明天我先试试重新换流动相试试
11楼2018-03-29 20:41:20
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5楼: Originally posted by sq8751 at 2018-03-28 11:12:11
还有 一种可能是你的柱子堵 了。看一压力曲线是否正常?

非常感谢您的解答!在实验过程中我对压力进行了监控,发现大多情况是不变的,偶尔有+-0.1Mpa的情况
12楼2018-03-29 20:43:04
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4楼: Originally posted by 姚首诚 at 2018-03-28 10:46:30
每个物质在相同波长下的响应值是不同的,所以峰面积不同是正常的。峰形一般出峰时间越晚,峰形就会越宽的。

谢谢您的解答!我接下来就先打算扫一下混标的紫外光谱看看,不知道结果怎样
13楼2018-03-29 20:44:07
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3楼: Originally posted by moviehua at 2018-03-28 09:34:04
每种物质在特定波长的吸收值是一样的嘛?你需要看的是同种物质在每次出峰面积及出峰时间是否一样。

谢谢您的解答!虽然确实需要关注的是每次的结果对比,但是峰型太丑实在拿不出来给老师看啊,您有什么建议可以改善吗
14楼2018-03-29 20:54:36
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2楼: Originally posted by SunflowerL at 2018-03-27 23:57:11
这是正常情况吧,如果后面的峰不是那种接受不了的话

谢谢您的解答!但是这峰真的拿不出来给老师看啊请问您有什么建议可以改善的吗
15楼2018-03-29 20:55:57
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