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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC进样物质浓度相同，峰面积不同，而且差很多，峰越来越宽！
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bbpiger

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC进样物质浓度相同，峰面积不同，而且差很多，峰越来越宽！已有5人参与

求助各位大神：

走HPLC出现以下问题：

1、进样的溶液中各物质（3个）浓度相同，但是峰面积随着出峰时间越来越低，尤其是第三个物质的峰面积更低。不仅如此，峰越来越宽！越来越矮！原因何在？

2、前几天做，和今天相同的条件相同的仪器，没有出现过倒峰，今天却出现了，是什么原因呢？


谢谢各位！
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1楼2018-03-27 22:52:26
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

moviehua

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每种物质在特定波长的吸收值是一样的嘛？你需要看的是同种物质在每次出峰面积及出峰时间是否一样。
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3楼2018-03-28 09:34:04
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姚首诚

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每个物质在相同波长下的响应值是不同的，所以峰面积不同是正常的。峰形一般出峰时间越晚，峰形就会越宽的。
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4楼2018-03-28 10:46:30
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sq8751

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有 一种可能是你的柱子堵 了。看一压力曲线是否正常？
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试剂分析，有我有你
5楼2018-03-28 11:12:11
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zpsune

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一种情况可能是你选的方法不适合后面物质的检测，最好换一个更好的方法。
第二种情况你还是都检查一遍吧，流动相配制有无问题，有无脱气，洗针液还有没有，还有各个泵怎么样，再就是看柱子怎么了，应该有好多种情况，都看一下吧。
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6楼2018-03-28 14:14:28
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Fu_shulin

木虫 (正式写手)
问题一，色谱踏板理论就是这么解释的，出峰越晚，峰越宽，高度越窄。

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7楼2018-03-29 12:59:56
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落叶的新生

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在同一波长下，每个物质的响应可能不同，所以有校正因子的存在。
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8楼2018-03-29 15:17:44
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zpsune

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by bbpiger at 2018-03-29 20:41:20
首先非常感谢您的解答！
但是我还是有疑问：第一种情况您说的方法不合适，是指我各个条件选的不合适吗，比如波长、柱温、pH、流动相比例、流速等吗，有没有可能是定量环出现问题了呢？

可是如果是定量环有问题 ...

嗯嗯，这些可能都影响峰形的，再就是梯度洗脱的比例也可能会影响。你还得确定在同一波长内这几种物质的响应情况，如果进不同浓度的相同物质，峰过宽且峰面积与浓度不成正比，也可能是相对应的物质超载了，非要相同浓度么？如果太矮的话，也可能这个波长不适合，用波长扫描试试各物质最大吸收波长啥的，总之，也不知道你这想做什么，情况很多。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2018-03-30 07:14:32
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普通回帖

SunflowerL

新虫 (小有名气)
这是正常情况吧，如果后面的峰不是那种接受不了的话

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2楼2018-03-27 23:57:11
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bbpiger

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Fu_shulin at 2018-03-29 12:59:56
问题一，色谱踏板理论就是这么解释的，出峰越晚，峰越宽，高度越窄。

谢谢提醒！但是第三个物质峰又矮又胖，虽然不是做方法，可是真的放不出来给老师看。如塔板理论说的，想问问如何改善这样的情况？
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9楼2018-03-29 20:32:17
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bbpiger

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 落叶的新生 at 2018-03-29 15:17:44
在同一波长下，每个物质的响应可能不同，所以有校正因子的存在。

噢噢噢！谢谢！我打算扫一下混标的紫外光谱图！看看我选的波长是否合适，因为之前是扫的单标，波长也是参考文献的，不知道有没有用
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10楼2018-03-29 20:34:28
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