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myhalic

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专业: 免疫生物学

[交流] 胶原诱导关节炎动物模型建立已有1人参与

1、实验材料
1.1 器械
三通管、1.5ml EP管、2ml注射器、1ml注射器
1.2 试剂
牛Ⅱ型胶原（CⅡ）、完全弗氏佐剂（CFA）、不完全弗氏佐剂（IFA）（美国Sigma公司）
1.3 实验所需溶液配制
A. 50mM乙酸：将50μl冰醋酸加入17.45 ml蒸馏水中混匀，于4℃冰箱预冷。
B. 牛II型胶原：将4 mg牛II型胶原加入到1ml 50mM乙酸充分溶解终浓度为4mg/ml，分装于1.5 ml EP管中，于4℃冰箱保存。
2、实验步骤
2.1 乳化胶原：等体积加入胶原溶液与完全弗氏佐剂（CFA）或者不完全弗氏佐剂（IFA）于冰面以2支2 ml二件式注射器连接三通管反复抽吸乳化，乳化时间约为30 min。
2.2 乳化结果检验：于烧杯中加入一定量蒸馏水，将乳液滴入水中，观察其性状。乳化完全的乳液于水中性状稳定，呈饱满片状浮于水面。且将乳液滴在水中5分钟内不分散，表明乳化完全。
2.3 两次免疫注射法造模：第1次为CFA乳化剂注射时间在第1天，第2次为IFA乳化剂在第21天加强免疫。注射方法：尾根部皮内注射乳剂50-100μl/只（保证每只小鼠每次免疫胶原量在100μg左右），避开血管，缓慢注射，以防渗漏。
3、模型评价标准
自造模第28天开始，每3~4天对免疫小鼠四肢关节做关节炎评分，采用16分评分法。评分细则如下：无关节发红、肿胀，计0分；关节红肿，轻度肿胀，限于跗骨或踝关节，计1分；关节红肿，轻度肿胀，肿胀范围从跗骨延续到踝关节，计2分；关节红肿，中度肿胀，从跖骨延续到踝关节，计3分；关节红肿，重度肿胀，从脚趾延续到整个踝关节甚至出现关节强直、活动障碍，计4分。四肢关节肿胀计分相加为关节炎的总评分。
4、注意事项
乳化过程全程需在冰上进行，乳化充分后会较难推动，推动时避免用力过猛，防止胶原漏出。

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